[发明专利]一种玉米醇溶蛋白抗炎多肽及其制备方法

权利要求书

1.玉米醇溶蛋白抗炎多肽，其特征在于其氨基酸序列为：

Phe-Leu-Pro-Pro-Val-Thr-Ser-Met-Gly。

2.一种玉米醇溶蛋白抗炎多肽的制备方法，其特征在于按照下述步骤进行：

(1)超声预处理玉米醇溶蛋白：定量称取玉米醇溶蛋白，加入蒸馏水配置成1～5％(m/v)悬浊液，进行超声波处理；

(2)玉米醇溶蛋白酶解物制备：调节上述蛋白溶液pH 7.5～8.0，加入蛋白酶，酶与底物的比例为1:20～50(w/w)，均匀混合，酶解温度50～70℃，酶解时间2～4h；酶解结束后调节混合液pH为7.0，并在沸水浴中灭酶10min，离心获得上清液，脱盐、浓缩、冷冻干燥成粉末；所述的蛋白酶为嗜热蛋白酶；

(3)模拟胃肠道消化：配制人工胃液；在37℃下，将步骤(2)制备得到的玉米醇溶蛋白酶解物与人工胃液以1:20～50混合，在震荡频率为120～180rpm条件下模拟胃消化2～4h；用NaOH调节pH为6.8，以1:100(w/v)加入胰酶至混合液，继续酶解4～6h；沸水浴灭酶10min，离心取上清液，脱盐、浓缩、冷冻干燥成粉末；

(4)Caco-2模拟小肠上皮细胞吸收：构建Caco-2细胞转运模型，将步骤(3)制备得到的玉米醇溶蛋白多肽消化产物配制成20mg/ml，加入到Caco-2细胞的绒毛面肠腔侧，0.5～4h后，收集基底面肠内壁侧转运的玉米醇溶蛋白肽，脱盐、冷冻干燥；

(5)采用UPLC-MC鉴定及分析多肽序列：对步骤(3)制备得到的玉米醇溶蛋白多肽消化产物、步骤(4)经过Caco-2细胞吸收的玉米多肽进行鉴定及多肽序列分析，筛选出离子强度强，在吸收过程中未被分解的多肽；分析得到玉米醇溶蛋白抗炎多肽，其氨基酸序列为：Phe-Leu-Pro-Pro-Val-Thr-Ser-Met-Gly；

(6)多肽的合成以及活性验证

对步骤(5)鉴定得到的玉米醇溶蛋白抗炎多肽进行人工合成，并验证其抗炎活性。

3.根据权利要求2所述的一种玉米醇溶蛋白抗炎多肽的制备方法，其特征在于其中步骤(1)所述的超声波处理工艺条件如下：扫频超声处理，超声处理时间10-30min，间歇比10s/3s，温度25℃；超声波处理频率及频率组合为：单频：20kHz、28kHz、40kHz之一；或者双频：20/28kHz、20/40kHz、28/40kHz之一；或者三频：20/28/40kHz。