[发明专利]一种通过诱导不定芽获得大花萱草再生植株的方法

权利要求书

1.一种通过诱导不定芽获得大花萱草再生植株的方法，包括以下步骤：

1)外植体选择、预处理

选取长度为1-2cm的根茎幼芽作为外植体，去除根系及叶片，消毒，无菌水浸洗，吸干水分，除去基部老化组织；

2)诱导不定芽

将经过预处理的外植体，接种于诱导培养基中，诱导培养28-35天，得到不定芽；

其中，培养条件为：温度23-27℃，湿度60-80％，光照10-12h/d，光照强度为1500-2500LX；

3)增殖培养

将步骤2)中获得的不定芽切分为单株，切去多余的基部组织以及愈伤组织，接种至增殖培养基中，培养28-35天，得到丛生芽；

其中，培养条件为：温度23-27℃，湿度60-80％，光照10-12h/d，光照强度为1500-2500LX；

4)生根培养

将步骤3)中的丛生芽切分成单株，去除不定芽、愈伤组织及老化的基部，接种于生根培养基，进行生根培养，得到生根苗；

培养条件为：温度23-27℃，湿度60-80％，光照10-12h/d，光照强度为1500-2500LX；

5)炼苗、移栽

将步骤4)中的生根苗取出，清洗，根系蘸杀菌剂，先在温室中弱光炼苗10～15天，温度20～25℃，再于自然光照下，炼苗10～20天，获得大花萱草再生植株。

2.根据权利要求1所述通过诱导不定芽获得大花萱草再生植株的方法，其特征在于，步骤2)中，所述诱导培养基以MS培养基为基本培养基，添加了6-苄氨基嘌呤1-5mg/L、萘乙酸1-5mg/L、蔗糖20-40g/L、琼脂3-5g/L，pH为5.8-6.0。

3.根据权利要求1或2所述通过诱导不定芽获得大花萱草再生植株的方法，其特征在于，步骤3)中，所述增殖培养基以MS培养基为基本培养基，添加了6-苄氨基嘌呤1-3mg/L、萘乙酸0.1-1mg/L、蔗糖20-40g/L、琼脂3-5g/L，pH为5.8-6.0。

4.根据权利要求1-3任一项所述通过诱导不定芽获得大花萱草再生植株的方法，其特征在于，步骤4)中，所述生根培养基以1/2MS培养基为基本培养基，添加了萘乙酸0.5-2mg/L、活性炭0.1-1g/L、蔗糖20-40g/L、琼脂3-5g/L，pH为5.8-6.0。

5.根据权利要求1所述通过诱导不定芽获得大花萱草再生植株的方法，其特征在于，步骤2)中，将经过预处理的外植体切分为2-4块。

6.根据权利要求1所述通过诱导不定芽获得大花萱草再生植株的方法，其特征在于，步骤3)中，进行切分的不定芽株高在1.5-2cm。

7.根据权利要求1所述通过诱导不定芽获得大花萱草再生植株的方法，其特征在于，步骤4)中，进行切分的丛生芽株高≥2cm。

8.根据权利要求1所述通过诱导不定芽获得大花萱草再生植株的方法，其特征在于，所述步骤5)炼苗、移栽过程的基质中，泥炭：珍珠岩＝(1：1)～(7：3)，体积比。

9.根据权利要求1所述通过诱导不定芽获得大花萱草再生植株的方法，其特征在于，步骤5)中，所述杀菌剂为五氯硝基苯可湿粉剂、多菌灵、或百菌清。