[发明专利]一种寄生曲霉的AFG1产毒发酵方法

说明书

本发明属于发酵工程技术领域，具体涉及一种寄生曲霉的AFG1产毒发酵方法。一种寄生曲霉的AFG1产毒发酵方法，该方法包括如下步骤：a、采用增菌培养基进行寄生曲霉孢子的复活增殖，b、采用固体发酵培养基进行固体发酵培养，增菌培养基和固体发酵培养基的组份中含有占培养基总重量1‑3%的酵母浸膏。本发明AFG1的产毒培养基解决了目前自然感染霉菌的谷物中AFG1浓度低、不均匀、耗时长等问题。

技术领域

本发明属于发酵工程技术领域，具体涉及一种寄生曲霉的AFG1产毒发酵方法。

背景技术

黄曲霉毒素(Aflatoxins，AFs)是由寄生曲霉、黄曲霉和集峰曲霉等其中的一些产毒真菌产生的次生代谢产物，具有致癌、致畸和致突变等三致作用。据文献报道，已鉴定出的AFs多达20余种，其中最为常见的是AFs是黄曲霉毒素B1(AFB1)、黄曲霉毒素B2(AFB2)、黄曲霉毒素G1(AFG1)、黄曲霉毒素G2(AFG2)。AFs可污染玉米、小麦、大豆和棉籽等谷物及油料农产品，亦可残留在一些DDGS、小麦麸、大豆粕和棉籽粕等农副产品中。当AFs污染的农产品作为人的食品时，会危害人的健康，轻度的可致亚健康状况，严重可引起肝脏病变，导致死亡；而AFs污染的农副产品饲喂动物时，常引起动物生产性能下降、抗病力降低，严重时会导致死亡等。因此，食品和饲料中AFs的污染问题引起了世界许多国家政府和食品安全监测机构的重视，设定了食品和饲料中的AFs限量标准。AFs的科学研究也备受国内外学者的关注，在猪、奶牛和禽类等动物中开展了相应试验。

然而，国内报道的发酵培养基中AFG1最高浓度仅为344ppb(冯建蕾，2004)，因此在开展AFG1相关科学研究时，均需从国外进口价格昂贵(452/mg)的AFG1样品，试验成本高，或需要进行商品预订，给相关科学研究带来不便。

综上所述，开发出AFG1的发酵培养基及应用方法，可为动物的AFG1毒理试验和AFs的食品安全研究提供试验素材。

发明内容

本发明提供了一种寄生曲霉的AFG1产毒发酵方法，用于解决目前自然感染霉菌的谷物中AFG1浓度低、不均匀、耗时长等问题。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种寄生曲霉的AFG1产毒发酵方法，该方法包括如下步骤：

a、采用增菌培养基进行寄生曲霉孢子的复活增殖，所述的增菌培养基各组分按重量百分比计包括：10-25％马铃薯，4-10％葡萄糖，1-3％琼脂，1-3％酵母浸膏，0.5％复合矿物盐，0.2-0.5g/L氯霉素，余量为水；

b、采用固体发酵培养基进行固体发酵培养，所述的固体发酵培养基各组分按重量百分比计包括：41-70％玉米糁，24-45％花生粕，4-10％蔗糖，0.4-1％复合矿物盐，1-3％酵母浸膏，按比例配制完后，调节固体发酵培养基含水量为10-20％；

所述的增菌培养基和固体发酵培养基中所述复合矿物盐的组分以质量百分比计为：40-60％硝酸钠，5-15％硫酸镁，5-15％氯化钾，15-30％磷酸氢二钾，3-8％硫酸锌，3-5％硫酸锰，0.2-0.8％五水硫酸亚铁，将上述各矿物盐原料混合均匀，粉碎过80目分样筛后再次混合，得到复合矿物盐。

作为优选，所述寄生曲霉是中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)提供的寄生曲霉菌(Aspergillus parasiticus)CGMCC NO.：3.0124。

作为优选，所述的增菌培养基和固体发酵培养基，用盐酸或氢氧化钠调节pH值为5.5-7.0后，置于2L锥形瓶中，盖上棉塞，在121-123℃，0.12MPa的条件下进行灭菌20min。

作为优选，所述的增菌培养基中的氯霉素成分在灭菌结束后，待增菌培养基冷却至40℃以下后加入混匀。