[发明专利]一种宁南霉素的纯化方法

说明书

本发明提供一种宁南霉素的纯化方法，所述的方法包括如下步骤:1)含有宁南霉素的清液制备；2)层析介质预处理；3)上样；4)洗脱；5)浓缩结晶。采用本发明纯化南宁霉素，具有纯度高、收率高、绿色环保的有益效果。

技术领域

本发明涉及微生物源生物杀菌剂领域，特别涉及一种宁南霉素的纯化方法。

背景技术

宁南霉素是中国科学院成都生物研究所历经七五、八五、九五国家科技攻关并研制成功的专利技术产品，这种菌是在四川省宁南县土壤分离而得，故将其发酵产物命名为宁南霉素。

宁南霉素Ningnanmycin，由中国科学院成都生物研究所研制成功的创新生物农药，1997年获得国家发明专利，证书号ZL93104287.9，由黑龙江强尔生化技术开发有限公司(1997年更名为德强生物股份有限公司)工业化生产成功，现已开发出2％水剂、8％水剂、10％可溶性粉剂、苦·宁种衣剂等宁南霉素系列产品，在烟草花叶病毒病、番茄病毒病、辣椒病毒病、水稻立枯病、大豆根腐病、水稻条纹叶枯病、苹果斑点落叶病、黄瓜白粉病上取得了登记，此外在防治油菜菌核病、荔枝霜疫霉病，其它作物病毒病、茎腐病、蔓枯病、白粉病等多种病害上也已大面积推广应用。

在原研专利：一种抗生素新农药—宁南霉素(ZL93104287.9)分离和鉴定了宁南霉素，公开的生产工艺流程为：斜面菌种—一级种子—二级种子—发酵罐—发酵罐—板框过滤—薄膜浓缩(2～3倍)—浓缩液加0.1-0.3苯甲酸钠—装瓶—成品，给出了水剂工艺但未有高纯度原药纯化工艺。

在《宁南霉素(16A-6)性质的初步鉴定》提供了一种纸层析色谱分离鉴定宁南霉素，《宁南霉素产生菌的选育和发酵条件研究》提供了一种发酵工业大规模发酵生产宁南霉素的选育和生产方法，但未有提供纯化工艺。

高效液相色谱HPLC检测方法参考了《宁南霉素液相检测条件的确定》进行改进，《宁南霉素产业化研究进展》报道的工艺，只是简单的发酵也经过处理后得到水剂或者高浓度固体剂，也并未给出纯化方法。

《诺尔斯链霉菌西昌变种发酵液宁南霉素分离纯化工艺及其性质研究》中研究了利用离子交换柱层析从发酵液中初步分离经过前处理的宁南霉素，确定了树脂分离的工艺条件，并利用颗粒活性炭进行40分钟脱色，再利用有机溶剂沉淀分离浓缩，然后再利用氧化铝吸附层析分离宁南霉素，并对最佳分离纯化条件进行了筛选，最后利用结晶和重结晶精制得宁南霉素。发明人前期通过该工艺获得纯品用于确证，和抑菌实验，纯度符合实验要求但收率低，不符合工业化大量需要原药纯品量的生产需求。(可以从后面的附图看出有的杂质和主峰很近，较难分离到极高纯度的，需要重复结晶才行。)

本发明可以大量制备得高纯度的宁南霉素批次间稳定，产品可以提供医药新适应症用途研究(一般需要至少公斤量以上的产品)提供可能，以便减少杂质等因素导致研究数据不准确和毒副作用。由上背景对比，本发明的技术不同于上述的技术操作，得到的有益效果，产品纯度高，可以为其他医药用途提供低廉高品质原料。产品收率提高，这个工序操作虽然会有部分废水产生，但在整体工业生产中可以经过回收套用等步骤节约用水，产生的废水量不高，使用的工艺都是低能耗的绿色生产工艺技术—膜过滤。

发明内容

为了解决背景技术中的技术问题，本发明是这样实现的：

一种宁南霉素的纯化方法，所述的方法包括如下步骤:

含有宁南霉素的清液制备：用盐酸将链霉菌发酵液的pH调至3.5～4.5并静置；然后向发酵液中加入硅藻土助滤剂并搅拌，固液分离过滤得清液；

硅藻土助滤剂是一种抗生素发酵领域常规过滤加的助滤剂。菌体有时会粘稠不利于过滤分离，在板框过滤等固液分离时，菌体压缩会挤压在滤布上导致流出液体不通畅。适量加入硅藻土助滤剂可以隔开菌体，有利于固液分离，同时避免产生过多固体废弃物。