[发明专利]GINS4基因或GINS4蛋白作为生物标志物在制备肺腺癌的预诊断试剂中的应用

说明书

本发明公开了GINS4基因或GINS4蛋白可用于制备肺腺癌的预诊断试剂和试剂盒、预后评估标志物及治疗药物等。本发明从肺腺癌和正常肺组织样本中抽提RNA后逆转录，实时荧光定量PCR技术检测其中GINS4的表达，结果显示GINS4在肺腺癌组织中高表达。提示GINS4可作为肺腺癌预诊断的分子标志物。本发明为肺腺癌的辅助诊断和预后预测提供了强有力的分子生物学工具，具有深远的临床意义和重要的推广应用前景。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及GINS4基因或GINS4蛋白在制备肺癌诊断、预后评估及治疗的应用，具体涉及GINS4基因或GINS4蛋白作为生物标志物在制备肺腺癌的预诊断试剂中的应用。

背景技术

肺癌是全球范围最常见、死亡率最高的恶性肿瘤，我国肺癌形势同样相当严峻，2015年我国肺癌新发73.33万例，死亡61.02万例，是我国第一大恶性肿瘤。肺癌根据组织学类型可分为小细胞肺癌(SCLC)及非小细胞肺癌(NSCLC)，后者可细分为肺腺癌、肺鳞癌和大细胞肺癌，其中肺腺癌占所有肺癌的50％以上，是主要的病理类型。多数肺腺癌起源于较小的支气管，为周围型肺癌，故患者早期多无明显的临床症状，但部分患者可出现早期的血行转移，且绝大多数患者在确诊时已属相对晚期，导致患者失去根治性手术的机会。因此，早期诊断和及早治疗对肺腺癌者的疗效与预后至关重要。

GINS4基因位于染色体8p11.21上，是促进哺乳动物胚胎发育的重要分子，其与Psf1、Psf2及Psf3共同组成GINS复合物，该复合物可进一步与细胞分裂周期蛋白45(celldivision cycle 45，CDC45)及微小染色体维持蛋白(mini-chromosome maintenancehelicase，MCM)相互作用，共同参与DNA解旋过程，调控细胞增殖。近年有研究显示，GINS复合物相关组分在多种恶性肿瘤中表达异常且影响细胞恶性行为：其中Psf1在前列腺癌中高表达，且与患者肿瘤分级、临床分期以及不良预后均显著正相关，Psf1同样也高表达于非小细胞肺癌，体外干扰Psf1后可抑制A549及H1299细胞增殖。Psf3在肺腺癌中高表达，且与患者预后低生存率显著正相关。GINS4在膀胱癌中高表达，体内外敲除GINS4可抑制膀胱癌细胞的增殖能力；GINS4也高表达于结直肠癌组织中，且GINS4高表达与患者淋巴结转移及预后不良存在密切关系。但GINS4在肺腺癌中的具体生物学作用及与患者病情及预后的关系尚不明确。

发明内容

本发明的目的在于提供GINS4基因或蛋白在制备肺腺癌诊断、预后评估及应用。发明人研究发现，GINS4基因编码的GINS4蛋白在肺腺癌中的表达明显升高，促进了肿瘤细胞恶性增殖及侵袭迁移的能力，在肺腺癌的发生发展中发挥重要作用。因此，GINS4基因或蛋白可成为肺腺癌诊断及预后评估的新标志物，且可作为新的分子靶向位点开展临床治疗工作。GINS4高表达于胚胎组织，在物种进化过程中十分保守，成熟个体中仅高表达于骨髓组织，在肺组织中表达较低。我们的研究显示GINS4在肺腺癌组织中异常高表达，通过kaplanmeier-plotter(www.kmplot.com)数据库中数据分析，发现高表达GINS4的肺腺癌患者预后相比低表达患者显著较差。

通过本发明发明人的研究表明，GINS4基因或蛋白作为生物标志物可用于制备肺腺癌的预诊断试剂和试剂盒，制备肺腺癌的预诊断预后评估试剂或治疗药物等。

本发明还提供了检测肺腺癌的试剂盒，所述试剂盒中含有如下引物对：

用于实时荧光定量检测GINS4基因表达的引物对：

正向引物：5’-TCAAGCCTGTAATCCCAGCA-3’(SEQ ID NO.1)；

反向引物：5’-GTTCAAGCGATTCTCCTGCC-3’(SEQ ID NO.2)；

内参基因β-Actin特异性PCR引物对：

正向引物：5’-CACCATTGGCAATGAGCGGTTC-3’(SEQ ID NO.3)；