[发明专利]人用流脑-肺炎球菌联合疫苗及其制备方法

权利要求书

1.人用流脑-肺炎球菌联合疫苗，其特征在于：以一重组ΔfHbp-NadA融合蛋白为载体蛋白，其中：

肺炎球菌荚膜多糖与脑膜炎球菌荚膜多糖分别独立地与所述载体蛋白连接；

所述载体蛋白包括重组ΔfHbp、柔性连接肽段和NadA，所述重组ΔfHbp包含fHbp可变体V1的V_A、V_B结构域以及fHbp可变体V3的V_C、V_D、V_E结构域；

所述脑膜炎球菌荚膜多糖不包括B群，所述重组ΔfHbp的氨基酸序列如序列表SEQ IDNO：1所示，其核苷酸编码序列如序列表SEQ ID NO：2所示；

所述重组ΔfHbp-NadA融合蛋白载体的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：4所示，其核苷酸编码序列如序列表SEQ ID NO：5所示；所述脑膜炎球菌荚膜多糖选自A群、C群、Y群和W135群脑膜炎球菌荚膜多糖的组合，所述肺炎球菌荚膜多糖为分离提纯血清型肺炎球菌荚膜上的荚膜多糖，所述血清型肺炎球菌的血清型选自1、2、3、4、5、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F、和33F。

2.如权利要求1所述的联合疫苗，其特征在于：所述柔性连接肽段的核苷酸编码序列如序列表SEQ ID NO：3所示。

3.权利要求1所述的联合疫苗的制备方法，其特征在于，步骤包括：

S1、制备重组ΔfHbp-NadA蛋白；

S2、制备A群、C群、Y群和W135群Nm菌荚膜多糖-载体蛋白复合物；

S3、制备肺炎球菌荚膜多糖-载体蛋白复合物。

4.如权利要求3所述的联合疫苗的制备方法，其特征在于,

步骤S1包括：

S1a、设计引物分别扩增得到fHbp V1基因片段、fHbp V3基因片段，再以这两段基因片段为模板进行搭桥PCR扩增得到重组的ΔfHbp全长片段，回收Δfhbp基因片段和pET载体，制备重组质粒pET-ΔfHbp；

S1b、设计引物扩增得到NadA蛋白的全长CDS序列，回收NadA基因片段和重组质粒pET-ΔfHbp，制备重组质粒pET-ΔfHbp-NadA；

S1c、将重组质粒pET-ΔfHbp-NadA转化表达菌株，得到重组ΔfHbp-NadA融合蛋白载体。

5.如权利要求3所述的联合疫苗的制备方法，其特征在于：步骤S2与步骤S3合并进行，采用CDAP活化多糖后衍化结合制备多价荚膜多糖-蛋白复合物。