[发明专利]一种检测细胞内ALDH活性的试剂盒及方法

权利要求书

1.一种检测细胞内ALDH活性的试剂盒，其特征在于，包括以下组分：BAAA-DA溶液，DEAB溶液和试验缓冲液；所述BAAA-DA溶液中BAAA-DA的浓度为0.6-1.2g/L；所述DEAB溶液中DEAB的浓度为1.2-1.8mM；所述试验缓冲液是含有ABC transportor抑制剂和牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液中ABC transportor抑制剂的浓度为45-55μM，牛血清白蛋白的浓度为0.8-1.2％。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包含HCl。

3.一种检测细胞内ALDH活性的方法，包括以下步骤：

1)用试验缓冲液将样品细胞稀释成细胞浓度为(0.8-2)×10⁶个/ml的单细胞悬液，可选为1×10⁶个/ml的单细胞悬液；

2)为每个待检测的样品细胞取出两个流式检测管，其中一个流式检测管作为检测管，另一个流式检测管作为对照管，试剂的加入方式为：

A、在检测管中加入1ml步骤1)所得单细胞悬液；之后向检测管中加入5μL活化稀释好的BAAA-DA溶液，混匀；

向对照管中加入5μL DEAB溶液；

B、将0.5ml步骤A所得混合液立即转移至已加入DEAB的对照管中混匀；

3)将检测管和对照管在37℃孵育30-60分钟；

4)将检测管和对照管离心，取出上清，将细胞沉淀重悬于0.5ml试验缓冲液中，冰上或者4℃存放；

5)对经过上述处理的样品细胞进行流式细胞仪检测；

其中：所述BAAA-DA溶液中BAAA-DA的浓度为0.6-1.2g/L；所述DEAB 溶液中DEAB的浓度为1.2-1.8mM；所述试验缓冲液是含有ABC transportor抑制剂和牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液中ABC transportor抑制剂的浓度为45-55μM，牛血清白蛋白的浓度为0.8-1.2％；所述活化稀释好的BAAA-DA溶液是指在浓度为0.6-1.2g/L的BAAA-DA溶液中加等体积的盐酸混匀并室温静置12-18分钟进行活化，优选15分钟，再加入6-6.5倍体积的试验缓冲液进行稀释并混匀所得，优选6.2倍体积。

4.根据权利要求1-2之一所述的试剂盒或权利要求3所述的方法，其特征在于，所述BAAA-DA溶液中BAAA-DA的浓度为1g/L，优选的BAAA-DA溶液所用溶剂为醋酸甲酯。

5.根据权利要求1-2之一所述的试剂盒或权利要求3所述的方法，其特征在于，所述DEAB溶液中DEAB的浓度为1.5mM，DEAB溶液所用溶剂为95％乙醇。

6.根据权利要求1-2之一所述的试剂盒或权利要求3所述的方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液中ABC transportor抑制剂的浓度为50μM，牛血清白蛋白的浓度为1％。

7.根据权利要求1-2之一所述的试剂盒或权利要求3所述的方法，其特征在于，ABC transportor抑制剂为Verapamil盐酸盐。

8.根据权利要求1-2之一所述的试剂盒或权利要求3所述的方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液的pH为7.0-7.5，优选为pH7.4；所述盐酸为浓度2mol/L的盐酸水溶液。

9.根据权利要求2所述的试剂盒或权利要求3所述的方法，其特征在于，所述BAAA-DA溶液的包装体积为50μL；所述DEAB溶液的包装体积为1mL；所述试验缓冲液为4瓶，每瓶的包装体积为25mL；所述HCl的包装体积为1.5mL。

10.根据权利要求1-2之一所述的试剂盒或权利要求3所述的方法，其特征在于，所述细胞来源于人脐带间充质干细胞、人外周血单个核细胞、人肺 癌细胞A549细胞系、人卵巢癌细胞SKOV3细胞系、人乳腺癌细胞SKBR-3或人卵巢癌细胞OVCAR-3。