[发明专利]核酸均一化方法及其试剂盒和应用

说明书

本发明提供一种核酸均一化方法及其试剂盒和应用，所述方法至少包括以下步骤：将核酸饱和吸附量相同的核酸吸附材料分别加入到若干份核酸溶液中，并保证每份核酸溶液中加入的核酸吸附材料都能达到核酸吸附饱和状态；分离饱和吸附核酸的核酸吸附材料；从分离获得的核酸吸附材料中分别洗脱核酸。本发明所公开的核酸均一化方法，操作简单，该方法可实现核酸、PCR产物或高通量测序文库浓度的快速、稳定等比例稀释。

技术领域

本发明属于高通量测序领域，具体涉及一种核酸均一化方法及其试剂盒和应用，该方法可实现核酸、PCR产物或高通量测序文库浓度的快速、稳定等比例稀释，为其实现规模化应用奠定了基础。

背景技术

核酸的筛查或诊断，已被广泛应用于临床、疾病防控、食品安全检测、进出口检疫检测等多种场景中。对于某些应用场景，如高通量测序，为了连续平行分析、增加实验检测量、降低测序成本，通常会将不同样品标记好后混合在一起进行测序，这需要保证不同的样品混样前浓度基本一致，最终不同样品可产生同样的数据量。

核酸均一化是指将若干份核酸制成每份核酸含量相等的过程。传统的核酸浓度的等比例稀释通常采用定量后连续稀释来实现，定量通常采用吸光度或荧光染料、荧光探针的方法，若采用吸光度定量则通常会受到其他物质(蛋白、多糖、非目的片段核酸和其他杂质)的显著影响，造成目的产物定量的较大偏差；采用荧光染料法或荧光探针法定量结果准确，但对多样品的连续稀释操作，则操作复杂，费时费力，尤其特殊的荧光定量仪器(如Qubit或各种荧光定量PCR仪)和对应试剂的引入，会极大的增加核酸样品等比例稀释的成本。另外，大量样品的自动等比例稀释操作也几乎不可能实现，这对临床、疾控等时效性要求高的应用场景局限性极大。

磁珠，作为纳米微球的一种，被广泛的应用于核酸的提取。核酸结合到磁珠上主要依靠静电作用、疏水作用和氢键作用。细胞或组织在裂解液作用下，其中的DNA/RNA被释放出来。此时经过表面修饰的超顺磁性氧化硅纳米磁珠即与核酸进行“特异性结合”，形成“核酸-磁珠复合物”。然后在外加磁场的作用下，复合物即分离出来。最后经过洗脱液洗去非特异性吸附的杂质、去盐、纯化后，即得到欲提取的核酸物质。

如何利用磁珠或者其他核酸吸附材料实现对核酸的均一化处理，尚未有文献报道。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种核酸均一化方法及其试剂盒和应用，用于解决现有技术中核酸均一化方法繁琐，偏差大，无法实现自动化等的缺陷。

为实现上述目的及其他相关目的本发明提供一种核酸均一化方法，至少包括以下步骤：

(1)将核酸饱和吸附量相同的核酸吸附材料分别加入到若干份核酸溶液中，并保证每份核酸溶液中加入的核酸吸附材料都能达到核酸吸附饱和状态；

(2)分离饱和吸附核酸的核酸吸附材料；

(3)从分离获得的核酸吸附材料中分别洗脱核酸。

优选地，所述核酸吸附材料可选择性地包被羧基、氨基、羟基或者硅基任意一种或几种。

优选地，各所述核酸溶液加入的核酸吸附材料相同且等量。

优选地，所述核酸吸附材料是纳米微球或玻璃颗粒。

优选地，所述核酸吸附材料为单分散纳米微球或单分散玻璃颗粒。

优选地，所述纳米微球可被磁性吸附。

优选地，所述纳米微球是采用油酸包被Fe₃O₄形成的。

优选地，所述纳米微球的平均粒径是0.5～2微米。

优选地，还包括步骤(4)向核酸中加入溶剂。

进一步地，还包括步骤(4)向核酸中加入溶剂。