[发明专利]羊肚菌、黄精和雪花莲活性多糖蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种活性多糖蛋白的制备方法，其包括如下步骤：(1)将原料进行超微粉碎至300目，然后加入氯化钠溶液进行浸提，过滤离心后，获得沉淀和上清液；(2)向所得上清液加入硫酸铵，使饱和度至40％，静置处理后离心，弃去沉淀；(3)利用超滤膜对步骤(2)所得物进行超滤，浓缩至原体积的20～30％；(4)向步骤(3)所得物加入乙醇，进行沉淀处理后离心，取沉淀；(5)对步骤(4)所得物进行冻干，获得所述活性多糖蛋白；所属原料为羊肚菌、黄精、雪花莲中的至少一种。本发明获得的活性多糖蛋白的纯度高且得率较大；与现有技术相比，本发明所得活性多糖蛋白的抑制氧自由基、清除羟自由基及抑制肿瘤细胞的活性有很大提高。

技术领域

本发明具体涉及羊肚菌、黄精、雪花莲等真菌与植物活性多糖蛋白及其制备方法和应用。

背景技术

糖结合蛋白是具有与各种糖专一结合特性的一类结合蛋白。其中大多数有血凝活力，有的还具有促细胞有丝分裂的作用。这些性质与凝集素没有明显的区别，因此有人称这类蛋白质为凝集素，也有人称它为受体(受体可以是蛋白质、糖蛋白、糖脂或其它化合物，所以应该说是多种受体中的一类)。如哺乳动物肝细胞膜上对半乳糖专一的结合蛋白，Ashwell等研究者在同一篇文章中又称它为凝集素和受体，主要根据其性质和功能从不同的角度命名，没有严格区分的标准。

糖结合蛋白存在于所有生物体：病毒、细菌、真菌、高等植物、动物乃至人的许多组织和器官中。其中有许多是各种细胞膜的组成成分，包括质膜、微粒体膜、高尔基复合体膜等。目前还陆续有新的糖结合蛋白被发现。经过数亿年的生物演化，这类蛋白质仍被保留下来，表明它们是生物体内不可缺少的成分，并具有重要的功能。至于它们在机体内的作用直至近几十年才为人们所重视。目前已有许多实验室对它们在生物体内的作用、作用机理正在进行广泛而深人的研究。

细胞与细胞间的粘着如海绵、粘菌的团聚、细菌感染宿主细胞等；机体生长发育和代谢调节控制，如体液中的废物和老化细胞的清除、分子或离子的传递、胚胎发育、粘菌生长的调节等；分子间的识别，如雌蕊受精、精子与卵的结合，共生固氮、防御病原体的侵袭等，都包含有糖结合蛋白的作用。糖结合蛋白主要的一些功能包括胞饮作用、粘着作用、结合蛋白在共生固氮中的作用。

从具有重要药用价值的植物和真菌中开展糖结合蛋白的研究，具有重要意义。主要的研究方向有：从中选取糖结合蛋白多肽未被研究的、有重要药用价值的植物以及多种药食兼用的真菌，集成运用蛋白质化学、肿瘤的细胞生物学、病毒学、分子生物学、生物信息学、蛋白质组学、蛋白质工程和结构生物学相关技术，分离具有自主知识产权的抗重大常见恶性肿瘤(肝癌、乳腺癌、肺癌、胃癌等)、抗艾滋病、流感和肝炎等病毒活性的新型糖结合蛋白质和多肽类化合物(特别是凝集素、受体等生物活性大分子)；进行其生物学活性和作用机制研究，揭示糖结合蛋白多肽药物与细胞内相关蛋白质相互作用的规律，发现并确立其作用新靶点；进行功能基因克隆、结构模拟、表达和定点突变研究以及空间结构研究等。

我们已研究报道过属于真菌糖结合蛋白的双孢菇凝集素通过调节细胞周期蛋白介导胰岛β细胞增殖。

不过，如何从一些中药中获得具有重要药用活性的多糖蛋白，目前还未形成统一的认识。

发明内容

针对现有技术的缺点和本领域的需求，本发明的目的之一在于提供一种活性多糖蛋白的制备方法，所述方法包括如下步骤：

(1)将原料进行超微粉碎至300目，然后加入氯化钠溶液进行浸提，过滤离心后，获得沉淀和上清液；

(2)向所得上清液加入硫酸铵，使饱和度至40％，静置处理后离心，弃去沉淀；

(3)利用超滤膜对步骤(2)所得物进行超滤，浓缩至原体积的20～30％；

(4)向步骤(3)所得物加入乙醇，进行沉淀处理后离心，取沉淀；

(5)对步骤(4)所得物进行冻干，获得所述活性多糖蛋白；