[发明专利]TM9SF1蛋白的应用和重组TM9SF1慢病毒表达载体及其构建方法

说明书

本发明公开了TM9SF1蛋白的应用和重组TM9SF1慢病毒表达载体及其构建方法，涉及生物技术领域。本发明提供的TM9SF1蛋白在制备用于抑制细胞生长的抑制剂、用于诱导细胞发生自噬的诱导剂以及用于诱导细胞发生内质网应激的诱导剂等领域中的应用，丰富了对九次跨膜超家族蛋白的认识，扩展了对TM9SF1的功能性研究，补充了TM9SF1蛋白在细胞或组织内的功能研究空白。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及TM9SF1蛋白的应用和重组TM9SF1慢病毒表达载体及其构建方法。

背景技术

九次跨膜超家族蛋白(transmembrane 9superfamily protein,TM9SF,又称Nonaspanins蛋白)结构上均含有一个大的非胞质区和9个跨膜区，在进化过程中高度保守。该家族蛋白在细菌、酵母、果蝇、哺乳动物等多个物种均有表达，与细胞免疫、细胞粘附、自噬、肿瘤侵袭和预后等多种生物功能密切相关，迄今为止尚未发现该家族成员在内质网应激方面功能的研究报道。

九次跨膜超家族蛋白1(transmembrane 9superfamily protein member 1，TM9SF1)别称MP70，属于九次跨膜超家族成员之一，于1997年被初次克隆，在人体组织(尤其是肺、肾和胰腺表达水平较高)和多种细胞系广谱表达，人类TM9SF1蛋白与相应酵母蛋白具有大约30％的同源性，提示其可能与某些古老而重要的生物功能有关。现阶段关于TM9SF1的研究多数集中在表达方面：根据Schlegel等报道，在对6-羟基多巴胺耐受和敏感的PC12细胞株中TM9SF1展现出表达差异性，相关机制和生理意义尚无研究；Wang等通过蛋白质组学方法发现TM9SF1在破裂的颅内动脉瘤血管壁高表达，随后在组织学方面进行验证，推测TM9SFl持续高表达参与颅内动脉瘤形成和破裂过程相关的炎性和血管壁蛋白质降解过程。He等通过高通量筛选发现TM9SF1可以诱导宫颈癌细胞系HeLa细胞发生自噬现象，然而并未揭示其相关分子机制。而目前关于TM9SF1蛋白在其他细胞或组织内的功能研究尚未见诸报道。

鉴于此，特提出本发明

发明内容

本发明的目的在于提供TM9SF1蛋白的在抑制细胞生长、引起细胞发生自噬、诱导细胞发生内质网应激等方面的应用。

本发明的另一目的在于提供一种重组TM9SF1慢病毒表达载体。

本发明的另一目的在于提供上述重组TM9SF1慢病毒表达载体的构建方法。

本发明的另一目的在于提供一种TM9SF1病毒的制备方法。

本发明的另一目的在于提供由上述制备方法得到TM9SF1病毒。

本发明的另一目的在于提供一种慢病毒表达系统。

本发明是这样实现的：

TM9SF1蛋白在制备用于抑制细胞生长的抑制剂中的应用。

TM9SF1蛋白在制备用于诱导细胞发生自噬的诱导剂中的应用。

TM9SF1蛋白制备用于诱导细胞发生内质网应激的诱导剂中的应用。

一种重组TM9SF1慢病毒表达载体，其由用于编码TM9SF1蛋白的核苷酸片段插入至pLVX-IRES载体上得到。

上述的重组TM9SF1慢病毒表达载体的构建方法，其包括：

用SEQ ID NO.1-2所示的引物进行PCR扩增得到用于编码TM9SF1蛋白的核苷酸片段；

用限制性内切酶SpeⅠ和BamHⅠ分别对所述核苷酸片段和pLVX-IRES载体进行双酶切；

将双酶切后的所述核苷酸片段和所述pLVX-IRES载体进行连接。