[发明专利]一种通过生物技术扩增脱氧胸苷三磷酸的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物技术，尤其涉及一种通过生物技术扩增脱氧胸苷三磷酸的方法。

背景技术

聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)由美国Centus公司的Kary Mullis发明，于1985年由Saiki等在Science杂志上首次报道，是近年来开发的体外快速扩增DNA的技术。通过PCR可以简便、快速地从微量生物材料中以体外扩增的方式获得大量特定的核酸，并且有很高的灵敏度和特异性，可在动物检疫中用于微量样品的检测。

DNA分子是由四种脱氧核糖核苷酸分子结合成的两条互补多聚核苷酸链。合成这些多聚核苷酸的前体是四种脱氧核苷三磷酸，脱氧胸苷三磷酸作为四种原料之一参与核酸分子的体内或体外扩增。附着生物技术工业的发展特别是DNA生物合成和聚合酶链式反应的推广，市场上对DNA扩增所需要的脱氧核苷三磷酸的需求量将会明显地持续升高。另外，由于脱氧胸苷三磷酸在抗病毒抗肿瘤，治疗心血管疾病等方面应用的推广，同样也会对本发明所阐述的产品，脱氧胸苷三磷酸的需求量的提高起到促进作用。

发明内容

本发明的目的是提供一种一种通过生物技术扩增脱氧胸苷三磷酸的方法，采用的技术方案是：

一种通过生物技术扩增脱氧胸苷三磷酸的方法，其包括：脱氧胸苷三磷酸模版DNA、限制性切刻酶、DNA聚合酶、脱氧核苷三磷酸、与靶核酸序列3’末端互补的寡核苷酸引物、表面活性剂，所述方法包括以下步骤：

a、在样品脱氧胸苷三磷酸模版DNA培养液中加入一种或多种能够在所选限制位点切割DNA的限制性切刻酶，该限制性切刻酶在该DNA的一条链上形成特定的3’末端；

b、加入寡核苷酸引物，该启动子引物5’区域包含被DNA的RNA聚合酶所识别的启动子序列，且其3’区域与步骤a形成的DNA特定的3’末端互补；

c、向样品中加入DNA聚合酶，脱氧核苷三磷酸，表面活性剂；

d、控制温度，将如此形成的混合物保持足够的时间，以进行扩增。

至少两种与靶核酸序列3’末端互补的寡核苷酸引物。

至少一种具有链置换能力的DNA聚合酶。

至少一种脱氧核苷三磷酸。

所述表面活性剂为聚氧乙烯失水山梨醇单脂肪酸脂。

所述培养液的温度控制在40℃～50℃内。

所述溶液在基本恒温的条件下进行扩增的时间为45～60分钟。

所述溶液的PH值控件在7.0－8.0。

本发明的有益效果是：本发明基本上在恒温的条件下扩增靶核酸序列，以外通过添加限制性切刻酶而不需要额外添加任何另外的试剂，而且时间短，工艺结构简单，降低了生产成本。

具体实施方式

一种通过生物技术扩增脱氧胸苷三磷酸的方法，其包括：脱氧胸苷三磷酸模版DNA、限制性切刻酶、至少一种具有链置换能力的DNA聚合酶、至少一种具有链置换能力的DNA聚合酶、至少两种与靶核酸序列3’末端互补的寡核苷酸引物、聚氧乙烯失水山梨醇单脂肪酸脂表面活性剂，所述方法包括以下步骤：a、在样品脱氧胸苷三磷酸模版DNA培养液中加入一种或多种能够在所选限制位点切割DNA的限制性切刻酶，该限制性切刻酶在该DNA的一条链上形成特定的3’末端；b、加入寡核苷酸引物，该启动子引物5’区域包含被DNA的RNA聚合酶所识别的启动子序列，且其3’区域与步骤a形成的DNA特定的3’末端互补；c、向样品中加入DNA聚合酶，脱氧核苷三磷酸，表面活性剂；d、控制温度，将如此形成的混合物保持足够的时间，以进行扩增。所述培养液的温度控制在40℃～50℃内，所述溶液在基本恒温的条件下进行扩增的时间为45～60分钟，所述溶液的PH值控件在7.0－8.0。