[发明专利]一种检测细菌对肠道黏附性的试剂盒及方法

权利要求书

1.一种用于检测细菌对肠道黏附性的试剂盒，其特征在于，包括细菌黏附板和细菌释放溶液，所述细菌黏附板上设置有多个细菌黏附孔，每个所述细菌黏附孔表面覆盖有小肠和/或大肠的一个或多个肠段中的黏液蛋白。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，每个细菌黏附板上包括表面上分别覆盖有小肠和大肠的所有肠段中的一个肠段中的黏液蛋白的细菌黏附孔至少各一个。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述细菌黏附孔通过以下方法制备：

S1：从畜禽小肠和/或大肠的一个或多个肠段的内表面刮取黏液，得到黏液蛋白混合物；

S2：从所述黏液蛋白混合物提取黏液蛋白溶液；

S3：用所述黏液蛋白溶液孵育将用于黏附细菌的孔，使所述黏液蛋白溶液中的黏液蛋白固定于所述孔的表面上，形成所述细菌黏附孔。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，S2包括以下步骤：

S21：将所述黏液蛋白混合物用pH7.4PBS缓冲液混匀，得到混悬液；

S22：所述混悬液于4℃、10000-12000r/min下离心10-20min；

S23：取离心后的上清，将黏液蛋白浓度调整为0.5-2mg/mL，即得到所述黏液蛋白溶液。

5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，S3包括以下步骤：

S31：将所述黏液蛋白溶液加入所述孔中，覆盖所述孔的表面，于4℃下孵育过夜；

S32：使用pH 7.4的PBS缓冲液洗涤所述孔，去除未固定的黏液蛋白，即得到所述细菌黏附孔。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述细菌释放溶液为质量分数0.1-0.5％的Triton X-100溶液。

7.一种检测细菌对肠道黏附性的方法，其特征在于，使用权利要求1-6中任一项所述的试剂盒进行检测，包括以下步骤：

1)将待检测的细菌制备成细菌悬液，通过活菌计数测定初始细菌数量；

2)将所述细菌悬液加入所述细菌黏附孔中孵育；

3)移除所述细菌悬液，洗涤已经用所述菌悬液孵育过的细菌黏附孔，去除未被黏附的细菌；

4)向所述细菌黏附孔中加入所述细菌释放溶液，释放黏附的细菌，进行活菌计数，得到黏附后的细菌数量，计算黏附率，计算公式为：

黏附率＝黏附后的细菌数量/初始细菌数量×100％。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤2)中，所述细菌悬液在所述细菌黏附孔中于37℃孵育1-2h。

9.根据权利要求7或8所述的方法，其特征在于，步骤4)中，所述释放溶液在所述细菌黏附孔中于37℃下孵育15-30min。