[发明专利]禽大肠杆菌、鸡伤寒沙门菌、鸡白痢沙门菌等的五重PCR检测方法及检测试剂盒

说明书

本发明提供了一种禽大肠杆菌、鸡伤寒沙门菌、鸡白痢沙门菌、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌的多重PCR引物组、包括该引物组的五重PCR检测试剂盒以及五重PCR检测方法。引物组包括：特异性扩增禽大肠杆菌phoA基因的引物对ECphoA‑F和ECphoA‑R；特异性扩增鸡伤寒沙门菌glgC基因的引物对SGglgC‑F和SGglgC‑R；特异性扩增鸡伤寒沙门菌和鸡白痢沙门菌speC基因的引物对SGPspeC‑F和SGPspeC‑R；特异性扩增肠炎沙门菌sdfⅠ基因的引物对SEsdfⅠ‑F和SEsdfⅠ‑R；特异性扩增鼠伤寒沙门菌stm4495基因的引物对STstm4495‑F和STstm4495‑R。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于检测禽大肠杆菌、鸡伤寒沙门菌、鸡白痢沙门菌、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌的多重PCR引物组、包括该引物组的五重PCR检测试剂盒以及利用该引物组的五重PCR检测方法。

背景技术

随着规模化养禽业的快速发展，疫病的发生和流行也相应增加，导致养禽业经济效益下降。重要的细菌性传染病如禽大肠杆菌病、鸡白痢、鸡伤寒等重要细菌病严重危害养禽业。

目前，国内主要依靠抗生素防治细菌病，但由于长期、不合理地使用抗生素导致：一方面产生广泛的耐药性，另一方面药物残留直接影响了动物产品的安全。因此，加强对这些细菌性疾病的长期监测和研究，对养禽业和公共卫生都具有重要意义。

国内外对细菌性疾病的诊断和监测技术种类繁多，主要包括：细菌分离培养及生化鉴定、分子生物学技术、免疫学技术等。PCR技术因其特异性强、敏感性高、操作简单、检测快速等优点而被广泛应用。

目前，针对禽大肠杆菌和不同血清型沙门菌建立了多种检测方法，然而，没有针对禽大肠杆菌、鸡伤寒沙门菌、鸡白痢沙门菌、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌的快速检测及鉴别诊断PCR方法。

发明内容

为了解决上述问题，本发明采用了如下技术方案：

本发明的一个目的是提供一种能够准确、快速、稳定、特异性和灵敏性高的检测禽大肠杆菌、鸡伤寒沙门菌、鸡白痢沙门菌、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌的引物组，其特征在于，包括：特异性扩增禽大肠杆菌phoA基因的引物对ECphoA-F和ECphoA-R；特异性扩增鸡伤寒沙门菌glgC基因的引物对SGglgC-F和SGglgC-R；特异性扩增鸡伤寒沙门菌和鸡白痢沙门菌speC基因的引物对SGPspeC-F和SGPspeC-R；特异性扩增肠炎沙门菌sdfⅠ基因的引物对SEsdfⅠ-F和SEsdfⅠ-R；特异性扩增鼠伤寒沙门菌stm4495基因的引物对STstm4495-F和STstm4495-R，

各个引物的核苷酸序列分别为：

ECphoA-F，5’-GGCAATACACTCACTATGCGCTG-3’,

ECphoA-R，5’-AGGATTCGCAGCATGATCCTG-3’；

SGglgC-F，5’-CGTCGCTATAAAGCGGAATATGTC-3’，

SGglgC-R，5’-CCTTTTCAAAACATACGCGAGTAG-3’；

SGPspeC-F，5’-GTTGCCGTACCGGTCGTAACG-3’，

SGPspeC-R，5’-TTCCTGACGGGCATCGACGGC-3’；

SEsdfⅠ-F，5’-GATGTGGTTGGTTCGTCACTG-3’，

SEsdfⅠ-R，5’-GCGAGACCTCAAACTTACTCAG-3’；

STstm4495-F，5’-CAGCGGTATGATGCGGTAGT-3’，