[发明专利]禽大肠杆菌、鸡伤寒沙门菌、鸡白痢沙门菌等的五重PCR检测方法及检测试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测禽大肠杆菌、鸡伤寒沙门菌、鸡白痢沙门菌、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌的多重PCR的引物组，其特征在于，包括：

特异性扩增禽大肠杆菌phoA基因的引物对ECphoA-F和ECphoA-R；特异性扩增鸡伤寒沙门菌glgC基因的引物对SGglgC-F和SGglgC-R；特异性扩增鸡伤寒沙门菌和鸡白痢沙门菌speC基因的引物对SGPspeC-F和SGPspeC-R；特异性扩增肠炎沙门菌sdfⅠ基因的引物对SEsdfⅠ-F和SEsdfⅠ-R；特异性扩增鼠伤寒沙门菌stm4495基因的引物对STstm4495-F和STstm4495-R，

各个引物的核苷酸序列分别为：

ECphoA-F，5’-GGCAATACACTCACTATGCGCTG-3’,

ECphoA-R，5’-AGGATTCGCAGCATGATCCTG-3’；

SGglgC-F，5’-CGTCGCTATAAAGCGGAATATGTC-3’，

SGglgC-R，5’-CCTTTTCAAAACATACGCGAGTAG-3’；

SGPspeC-F，5’-GTTGCCGTACCGGTCGTAACG-3’，

SGPspeC-R，5’-TTCCTGACGGGCATCGACGGC-3’；

SEsdfⅠ-F，5’-GATGTGGTTGGTTCGTCACTG-3’，

SEsdfⅠ-R，5’-GCGAGACCTCAAACTTACTCAG-3’；

STstm4495-F，5’-CAGCGGTATGATGCGGTAGT-3’，

STstm4495-R，5’-TCACCGGTGGACATGCCTGC-3’；

引物对ECphoA-F和ECphoA-R用于扩增的目的片段的大小为761bp；

引物对SGglgC-F和SGglgC-R用于扩增的目的片段的大小为83bp；

引物对SGPspeC-F和SGPspeC-R用于扩增的目的片段的大小为249bp；

引物对SEsdfⅠ-F和SEsdfⅠ-R用于扩增的目的片段的大小为409bp；

引物对STstm4495-F和STstm4495-R用于扩增的目的片段大小为569bp。

2.根据权利要求1所述的引物组在制备用于检测禽大肠杆菌、鸡伤寒沙门菌、鸡白痢沙门菌、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌的五重PCR检测试剂盒中的应用。

3.一种五重PCR检测试剂盒，用于检测禽大肠杆菌、鸡伤寒沙门菌、鸡白痢沙门菌、肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌，其特征在于，包括：

用于建立PCR反应体系的2×PCR预混液和引物组，

其中，所述PCR反应体系用于所述引物组中的各个引物对进行特异性扩增，

所述引物组为权利要求1的引物组。

4.根据权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于：

其中，所述2×PCR预混液的体积为12.5μL，

在所述引物组中，引物对ECphoA-F和ECphoA-R的体积各为0.5μL，引物对SGglgC-F和SGglgC-R的体积各为0.2μL，引物对SGPspeC-F和SGPspeC-R的体积各为0.3μL，引物对SEsdfⅠ-F和SEsdfⅠ-R的体积各为0.4μL、引物对STstm4495-F和STstm4495-R的体积各为0.5μL。

5.一种非疾病诊断和治疗目的的检测禽大肠杆菌、鸡伤寒门菌、鸡白痢沙门菌、肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌的五重PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，基于待检测细菌制备得到PCR模板；

步骤2，制备特异性引物组，采用权利要求1的引物组制备得到特异性引物组；

步骤3，进行PCR扩增反应，基于步骤1得到的所述PCR模板，采用步骤2得到的特异性引物组建立得到包括所述的引物组的PCR反应体系，然后采用该PCR反应体系在预定PCR反应参数条件下进行PCR扩增反应得到PCR扩增产物；

步骤4，进行电泳检测，对所述扩增产物进行电泳检测得到电泳结果，根据所述电泳结果判定是否出现所述禽大肠杆菌、所述鸡伤寒沙门菌、所述鸡白痢沙门菌、所述肠炎沙门菌或所述鼠伤寒沙门菌。