[发明专利]一种重组人粒细胞集落刺激因子的纯化方法有效
| 申请号： | 201710343246.2 | 申请日： | 2017-05-16 |
| 公开（公告）号： | CN107188952B | 公开（公告）日： | 2020-07-28 |
| 发明（设计）人： | 陈磊;王宏伟;马宣宣;翟紫凝;朱壮志;张晨光;孙金星 | 申请（专利权）人： | 江苏恒瑞医药股份有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/535 | 分类号： | C07K14/535;C07K1/18;C07K1/107 |
| 代理公司： | 北京戈程知识产权代理有限公司 11314 | 代理人： | 程伟 |
| 地址： | 222047 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 重组 粒细胞 集落刺激因子 纯化 方法 | ||
1.一种重组人粒细胞集落刺激因子的纯化方法，包括：将重组人粒细胞集落刺激因子复性液上样至以混合模式填料的阳离子层析柱进行纯化，先采用缓冲液进行杂质洗脱，再进行样品洗脱收集样品峰，其中，所述混合模式填料选自Capto MMC填料；HCX填料；Bestarose Diamond MMC填料；UniMSP-30S填料；所述杂质洗脱所用缓冲液离子强度为5～20mmol/L，pH为7.2～7.8，所述样品洗脱所用缓冲液离子强度为20～100mmol/L，pH为8.0～9.0。
2.根据权利要求1所述的重组人粒细胞集落刺激因子的纯化方法，其特征在于所述混合模式填料选自Capto MMC填料和HCX填料。
3.根据权利要求1-2任一所述的重组人粒细胞集落刺激因子的纯化方法，其特征在于，还包括混合模式填料的阳离子层析柱在上样前经缓冲液平衡步骤，所述平衡缓冲液离子强度为5～50mmol/L，pH为3.0～6.5。
4.根据权利要求1所述的重组人粒细胞集落刺激因子的纯化方法，其特征在于所述杂质洗脱所用缓冲液中缓冲剂选自乙酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐、碳酸盐、Tris、甘氨酸、组氨酸中的一种或多种，所述样品洗脱所用缓冲液中缓冲剂选自乙酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐、碳酸盐、Tris、甘氨酸、组氨酸中的一种或多种。
5.根据权利要求3所述的重组人粒细胞集落刺激因子的纯化方法，其特征在于所述平衡缓冲液中缓冲剂选自乙酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐、碳酸盐、Tris、甘氨酸、组氨酸中的一种或多种。
6.根据权利要求1所述的重组人粒细胞集落刺激因子的纯化方法，其特征在于所述样品洗脱采用pH洗脱或盐离子浓度洗脱方式。
7.根据权利要求6所述的重组人粒细胞集落刺激因子的纯化方法，其特征在于所述样品洗脱采用pH洗脱方式。
8.根据权利要求1-7任一所述的重组人粒细胞集落刺激因子的纯化方法，其特征在于，还包括将收集得到的纯化样品进行缓冲液置换的步骤。
9.根据权利要求8所述的重组人粒细胞集落刺激因子的纯化方法，其特征在于所述缓冲液置换采用透析、超滤、脱盐柱层析方式中的一种或多种。
10.根据权利要求9所述的重组人粒细胞集落刺激因子的纯化方法，其特征在于所述超滤选自中空纤维超滤或膜包超滤。
11.根据权利要求9所述的重组人粒细胞集落刺激因子的纯化方法，其特征在于所述超滤选自膜包超滤。
12.根据权利要求10所述的重组人粒细胞集落刺激因子的纯化方法，其特征在于所述膜包超滤膜孔径为1KD～20KD。
13.根据权利要求10所述的重组人粒细胞集落刺激因子的纯化方法，其特征在于所述膜包超滤膜孔径为3KD、5KD或10KD。
14.根据权利要求10所述的重组人粒细胞集落刺激因子的纯化方法，其特征在于所述膜包超滤膜孔径为5KD。
15.根据权利要求11所述的重组人粒细胞集落刺激因子的纯化方法，其特征在于所述膜包超滤中膜包材料选自聚偏氟乙烯、改良纤维素、聚醚砜、改良聚醚砜中的一种或多种。
16.根据权利要求1-15任一所述的重组人粒细胞集落刺激因子的纯化方法，其特征在于，还包含在上样前对复性液进行pH调节，过滤步骤。
17.根据权利要求16所述的重组人粒细胞集落刺激因子的纯化方法，其特征在于所述复性液进行pH调节后为2.0～6.0，所述过滤采用中空纤维过滤、膜包过滤、死端过滤方式中的一种或多种。
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