[发明专利]一种携载抗肿瘤药物连接CD22单抗靶向淋巴瘤的血小板靶向载药体系的制备方法

权利要求书

1.一种携载抗肿瘤药物连接CD22单抗靶向淋巴瘤的血小板靶向载药体系的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)环境温度为20±5℃，在全血中加入重量百分含量为2-4％柠檬酸钠溶液，离心后得到血小板丰富血浆；

(2)将步骤(1)得到的血小板丰富血浆再深度离心，并用PBS缓冲液洗涤至不再含有血浆及其他血液成分，得到洗涤血小板；

(3)将步骤(2)得到的洗涤血小板与3-马来酰亚胺基苯甲酸-N-羟基琥珀酰亚胺酯试剂(MBS)试剂在37±0.5℃的避光环境中震荡反应1～2小时，离心洗涤，得到表面修饰有指向巯基的马来酰亚胺基团的血小板；

(4)将抗CD22单抗与Traut’s试剂在37±0.5℃的避光环境中震荡反应1～2小时，然后超滤离心，得到富含巯基的抗CD22单抗；

(5)将步骤(3)得到的表面修饰有指向巯基的马来酰亚胺基团的血小板与步骤(4)得到的富含巯基的抗CD22单抗混合，在37±0.5℃的避光环境中震荡反应8～12小时，经离心洗涤，得到连接CD22单抗的血小板；

(6)将步骤(5)得到的连接CD22单抗的血小板与抗肿瘤药物在37±0.5℃的避光环境中震荡反应1～2小时，得到抗肿瘤药物与连接CD22单抗的血小板反应物；

(7)将步骤(6)得到的抗肿瘤药物与连接CD22单抗的血小板反应物通过琼脂糖凝胶2B分离柱分离，并离心洗涤，得到携载抗肿瘤药物连接CD22单抗的血小板靶向载药体系。

2.根据权利要求1所述的一种携载抗肿瘤药物连接CD22单抗靶向淋巴瘤的血小板靶向载药体系的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，全血与重量百分含量为2-4％柠檬酸钠溶液的体积比为7:1～10:1。

3.根据权利要求1所述的一种携载抗肿瘤药物连接CD22单抗靶向淋巴瘤的血小板靶向载药体系的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中离心为以1200rpm离心5～10min。

4.根据权利要求1所述的一种携载抗肿瘤药物连接CD22单抗靶向淋巴瘤的血小板靶向载药体系的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中深度离心为以3600rpm离心8～12min，而得到洗涤血小板计数控制在(2.5-3.0)×10⁵/ul。

5.根据权利要求1所述的一种携载抗肿瘤药物连接CD22单抗靶向淋巴瘤的血小板靶向载药体系的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中洗涤血小板与MBS试剂体积比为50：1，而离心洗涤是用PBS缓冲液以3600rpm离心洗涤2～3次，每次5～8min。

6.根据权利要求1所述的一种携载抗肿瘤药物连接CD22单抗靶向淋巴瘤的血小板靶向载药体系的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中抗CD22单抗浓度为1mg/ml，且抗CD22 单抗与Traut’s试剂的浓度比为50:1，而超滤离心是于超滤离心管中3300rpm离心过滤20～30min。

7.根据权利要求1所述的一种携载抗肿瘤药物连接CD22单抗靶向淋巴瘤的血小板靶向载药体系的制备方法，其特征在于，所述步骤(5)中离心洗涤是用PBS缓冲液以3600rpm离心洗涤2～3次，每次5～8min。

8.根据权利要求1所述的一种携载抗肿瘤药物连接CD22单抗靶向淋巴瘤的血小板靶向载药体系的制备方法，其特征在于，所述步骤(6)中抗肿瘤药物为蒽环类抗肿瘤药物或烷化剂类抗肿瘤药物的一种，抗肿瘤药物的浓度为0.05～0.15mmol/L，且抗肿瘤药物与连接CD22单抗的血小板、洗涤血小板的体积比分别为(1～4):1和2:1。

9.根据权利要求1所述的一种携载抗肿瘤药物连接CD22单抗靶向淋巴瘤的血小板靶向载药体系的制备方法，其特征在于，所述步骤(7)中离心洗涤是用PBS缓冲液以3600rpm离心洗涤2～3次，每次5～8分钟。