[发明专利]一种模拟移动床技术制备分离虫草素的方法

说明书

一种模拟移动床技术制备分离虫草素的方法，其特征在于：将烘干的富含虫草素的北冬虫夏草粉碎、经超声波水提取，离心取上清液、大孔树脂吸附，除蛋白质、洗脱，浓缩、除多糖，再浓缩得到虫草素粗提取液，虫草素粗提取液经过分离纯化，最后浓缩得到高纯度的虫草素产品；有益效果：采用模拟移动床色谱技术制备分离虫草素，选用合适的填料和相应的流动相，可以实现虫草粗提液中虫草素与其他杂质的分离，产品虫草素的纯度和收率都可以达到99%以上，可以实现对虫草素分离过程的合理设计和优化，应用非线性优化等方法对建立的模型操作条件进行优化，可以最大限度的获得虫草素产品的生产能力。

技术领域

本发明属于化工色谱分离技术领域，尤其涉及一种利用模拟移动床技术制备分离高纯度虫草素的方法。

背景技术

虫草素又名3’-脱氧腺苷，是一种核苷类抗菌素，1951年首次从蛹虫草中分离得到，具有光谱抗菌活性，具有抗菌、消炎、抗肿瘤、抗病毒、调节人体免疫力等作用，可用于白血病的治疗，目前美国将虫草素作为治疗白血病药物的研究已经进入III期临床，近20年来，在临床医疗领域取得了开创性的成果；随着科学技术的发展，虫草素在临床上的应用将会得到进一步的发掘，因此其具有重要的开发和应用价值；然而虫草素的大量提取分离得到纯品存在困难，导致国际市场上虫草素的价格非常昂贵，高达2000美元/克以上，研究者们通过北冬虫夏草发酵生产虫草素获得了富含虫草素的发酵液，高效率、高纯度、高收率的分离提取成为日益关注的问题。

目前常用的虫草素分离纯化方法有离子交换树脂吸附法、硅胶柱层析以及高速逆流色谱技术等，上述方法的处理能力、收率都不尽人意，难以进行工业化生产，近年来大孔树脂吸附分离虫草素得到研究者的关注，大孔树脂吸附容量大、选择性好、吸附速率快、解吸条件温和等优点，适合用于从发酵液或提取液中富集得到虫草素粗提液。

模拟移动床是一种连续制备色谱分离技术，其高效的处理能力使其区别于一般的色谱分离技术，工业上应用模拟移动床技术分离功能性糖、手性物质、生物活性药物等工艺日趋成熟，通过上述大孔树脂富集得到含虫草素的粗提液，应用模拟移动床技术进行精制高纯度虫草素，可以实现虫草素的高效率、高纯度、高收率、低溶剂消耗、无有毒溶剂引入等优势；CN102321135A公开了一种利用高速逆流色谱分离纯化虫草素的方法，采用两相分配系数K值在0.5～1.0范围内的溶剂系统，可以得到纯度大于98%的虫草素产品；CN102977172A公开了一种提取虫草素的方法，采用反相ODS填料柱富集虫草素，在通过HPLC纯化虫草素的方法；CN104926904A公开了一种从蛹虫草菌皮中提取纯化虫草素的方法，经硅胶层析柱处理后浓缩洗脱液，最后结晶得到高纯度的虫草素。

上述方法都是间歇操作过程，处理能力较低，高速逆流色谱虽然处理量已经可以达到克级，但是仍然不能满足市场需求，而且溶剂消耗量大。

发明内容

本发明的目的是提供一种以富含虫草素的北冬虫夏草为原料，通过NKA-II大孔树脂富集虫草素，除杂后得到虫草素粗提液，以反相C18填料为固定相，以乙醇水溶液为流动相，利用模拟移动床系统从上述粗提掖中得到高纯度虫草素的方法。

为实现上述目的本发明采用的技术方案如下：

一种模拟移动床技术制备分离虫草素的方法，其特征在于：将烘干的富含虫草素的北冬虫夏草粉碎、经超声波水提取，离心取上清液、大孔树脂吸附，除蛋白质、洗脱，浓缩、除多糖，再浓缩得到虫草素粗提取液，虫草素粗提取液经过分离纯化，最后浓缩得到高纯度的虫草素产品；具体包括以下步骤：

（1）、将烘干的富含虫草素的北冬虫夏草粉碎、经超声波水提取，离心取上清液、经大孔树脂吸附、除杂后的虫草素粗提液溶解在流动相中配成进料液，浓度0－1g/L；

（2）、用两步模拟移动床分离，在进行第一步模拟移动床分离时，将进料液和乙醇水溶液洗脱液连续通入模拟移动床色谱分离系统中，从萃取液口连续收集虫草素与N6-(2羟乙基)腺苷溶液，从萃余液口连续收集腺苷及其他杂质；