[发明专利]一种抗菌物质Bovisin及其制备方法

权利要求书

1.一种抗菌物质Bovisin，其特征在于，分子量为910Da，由6个胺基酸残基和1个17-胍基-3-羟基十五烷酸组成；

其化学式如下：

2.一种权利要求1所述的抗菌物质Bovisin的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(a)将牛类芽孢杆菌CGMCC No.8333接种于麸皮培养基中进行发酵，得到发酵液；

(b)将步骤(a)得到的发酵液离心取上清，置于高温水浴中灭活蛋白酶，待冷却后，加入正丁醇萃取，离心取正丁醇相，除去正丁醇，加水溶解，冷冻干燥，得到粗品1；

(c)将步骤(b)得到的粗品1通过凝胶柱分离，收集抑菌活性组分，冷冻干燥，得到粗品2；

(d)将步骤(c)得到的粗品2通过HPLC纯化，收集抑菌活性组分，冷冻干燥，得到抗菌物质Bovisin。

3.根据权利要求2所述的抗菌物质Bovisin的制备方法，其特征在于，步骤(a)中，所述牛类芽孢杆菌CGMCC No.8333的接种量为1.6 × 10⁶ ～8 × 10⁶cfu /mL。

4.根据权利要求2所述的抗菌物质Bovisin的制备方法，其特征在于，步骤(a)中，所述麸皮培养基包括麸皮和水，麸皮占麸皮培养基的质量百分比2～6％。

5.根据权利要求2所述的抗菌物质Bovisin的制备方法，其特征在于，步骤(a)中，所述发酵为震荡培养，震荡速度为100～300rpm；所述发酵的温度为25℃～35℃；所述发酵的时间为48～96h。

6.根据权利要求2所述的抗菌物质Bovisin的制备方法，其特征在于，步骤(b)中，所述离心的速度为6,000～10,000g，离心的时间为10～20分钟。

7.根据权利要求2所述的抗菌物质Bovisin的制备方法，其特征在于，步骤(b)中，所述高温水浴的温度为60～80℃，保温时间为10-30分钟。

8.根据权利要求2所述的抗菌物质Bovisin的制备方法，其特征在于，步骤(b)中，正丁醇萃取时，正丁醇加入量为发酵液体积的0.5～2倍，萃取次数为3～5次，每次萃取静置的时间为8～16h。

9.根据权利要求2所述的抗菌物质Bovisin的制备方法，其特征在于，步骤(c)中所述的凝胶柱为LH20凝胶柱，规格为D2.6cm×30cm；分离条件包括：以体积比为3：1的甲醇-水溶液进行等度洗脱，洗脱速度为2mL/min，洗脱液的收集速度为2.5min/管。

10.根据权利要求2所述的抗菌物质Bovisin的制备方法，其特征在于，步骤(d)中所述的HPLC采用的色谱柱为C₁₈柱，规格为Sunfire C₁₈柱，20mm×250mm，粒径5μm；分离条件包括：以含0.1％TFA的水为A相，含0.1％TFA的乙腈为B相，进行梯度洗脱，洗脱速度为4mL/min，洗脱液的收集速度为1.5min/管。

11.根据权利要求10所述的抗菌物质Bovisin的制备方法，其特征在于，收集保留时间在32.14min的组分。