[发明专利]一种检测血管支架材料体外内皮化的模型制备及应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种检测血管支架体外内皮化模型的制备方法及应用。

背景技术

血管支架是用于治疗血管疾病、冠脉、外周血管栓塞的植入类医疗器械。血管支架产品经历了几代产品技术的发展，从以金属材料为基础的不可降解血管支架到以高分子材料为基础的可降解血管支架。作为未来新一代的血管支架，以高分子材料为基础的可降解血管支架有望解决目前临床上普遍使用的永久性金属支架所带来的一系列可能并发症，如晚期内膜增生，支架内再狭窄及血栓形成等；产品的可吸收性让患者不必持续担心有异物永久地留在体内，也使患者避免终生服用抗凝药。

聚乳酸(PLLA)是目前生物材料研究和应用最多的合成材料之一，良好的生物相容性以及可降解性能使其在可降解血管支架领域得以应用。

良好的内皮化是植入的血管支架材料完成降解的前提，因此对植入的血管支架材料内皮化做出评价具有很大研究意义。但是在临床前安全性评价的体外试验中，没有针对血管支架材料内皮化效果的评价方法，导致只能通过大动物试验，即将材料通过介入手术植入大动物的血管以观察内皮化效果。这种操作费时费力且价格昂贵。现在缺乏在体外对血管支架材料的内皮化效果进行评判的模型装置和评价方法。

发明内容

本发明一个目的是提供一种待植入材料体外内皮化检测模型。

本发明提供的模型，其包括多孔板、胶原凝胶和待植入材料；

所述胶原凝胶置于所述多孔板的孔中，所述待植入材料以浸入且不浸没的方式置于所述胶原凝胶上；

所述待植入材料为网格状。

上述模型中，所述网格状待植入材料的直径小于所述多孔板的孔径；

或所述多孔板中的孔为非通孔(具有下底面)。

上述模型中，所述多孔板为48孔板，孔径为1.2cm；

或所述网格状待植入材料为圆片状，直径为1cm。

每个网格为宽1mm，长2mm的长方形。

上述模型中，所述胶原凝胶按照如下方法制备：将胶原在含有NaOH和乙酸的体系中进行反应形成胶原凝胶；

或所述反应在所述多孔板的孔中进行。

上述模型中，所述胶原在所述反应的体系中的浓度为2ug/ml。

上述模型中，所述反应为37℃放置30-60min。

上述模型中，所述胶原选常见市售胶原，如鼠尾胶原、牛肌腱胶原蛋白、猪皮胶原或鱼胶原等。

上述模型中，所述待植入材料为PLLA。

本发明另一个目的是提供一种制备待植入材料体外内皮化检测模型的方法。

本发明提供的方法，包括如下步骤：先在多孔板中制备所述胶原凝胶，再将所述网格状待植入材料以浸入且不浸没的方式置于所述多孔板孔中的胶原凝胶上，得到待植入材料体外内皮化检测模型。

上述的模型在制备检测待植入材料体外是否发生内皮化的产品中的应用也是本发明保护的范围；

或上述模型和细胞在制备检测待植入材料体外是否发生内皮化的产品中的应用；所述细胞为内皮细胞和平滑肌细胞也是本发明保护的范围。

本发明第三个目的是提供一种检测或辅助检测待植入材料体外是否发生内皮化的方法。

本发明提供的方法，包括如下步骤：

将细胞接入上述的模型的表面，检测所述细胞是否在所述模型的网格状待植入材料上贴壁且增殖生长，若贴壁且增殖生长，则该材料发生或候选发生内皮化，若不贴壁且增殖生长，则该材料不发生或候选不发生内皮化；

所述细胞为内皮细胞和平滑肌细胞，接种浓度均为1×10⁵个/种。

本发明是制备一种网格支架结构以及建立了一种网格支架与细胞系共培养的方法。这种网格支架结构模拟血管支架的网格状结构，在体外将内皮细胞和平滑肌细胞与这种网格状结构共培养，通过观察细胞在这种网格结构上的生长状态、贴壁状态和覆盖状态来评判这种材料是否适于作为血管支架的制备材料。这个发明就是建立了一种试验方法，用来筛选可以作为血管支架的材料，内皮细胞和平滑肌细胞在材料上的生长状态是衡量指标。现在缺乏在体外对血管支架材料的内皮化效果进行评判的模型装置和评价方法，只能依靠动物实验来对材料进行评价。本发明建立一种在体外评价材料的方法，有助于减少动物用量，符合动物福利的要求，减少企业研发成本。

附图说明

图1为网格状支架示意图。

图2为网格状支架嵌入鼠尾胶原凝胶制备得到的模型示意图。

图3为HUVEC及HCASMC两种细胞于内皮化模型中培养4天后的显微照片，其中A、B为HCASMC；C、D为HUVEC。