[发明专利]检测甲胎蛋白的单克隆抗体及试剂盒和应用

说明书

本发明公开了检测甲胎蛋白的单克隆抗体及试剂盒和应用。本发明单抗Ab1、Ab3和Ab4这3株单抗均能在人肝癌细胞和肝癌组织中特异性识别人源的天然hAFP，具有很好的特异性。本发明公开了能特异性结合人甲胎蛋白的鼠源性单克隆抗体，该抗体能结合人甲胎蛋白的不同表位，形成双抗体夹心模式，实现人血清中的甲胎蛋白的定量检测，对产前诊断及肝癌早期诊断具有一定作用，具有很好的推广应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及检测甲胎蛋白的单克隆抗体及试剂盒和应用。

背景技术

人甲胎蛋白(human alpha fetoprotein，hAFP)是一种由胎儿肝细胞和卵黄囊合成出的胚胎性糖蛋白，其功能与人血清白蛋白(human serum albumin，HSA)相似，可视其为胎儿发育时期的HSA替代物。正常情况下，hAFP仅存在于胎儿血清中，胎儿出生一年后hAFP浓度可降回正常人水平(5ng/ml)，正常人血清中的浓度一般不高于20ng/ml。当身体发生原发性肝癌时，肝癌细胞可大量分泌hAFP于外周血中，引发血液hAFP浓度的异常升高。

hAFP是最早发现的肿瘤标志物之一，其长期以来被作为肝癌、胎儿缺陷以及胚胎相关癌的重要血清分子标记物，是血液检验中的重要评价指标分子。除应用于产前诊断和肝细胞癌诊断外，hAFP的血液检测对肝损伤、肝硬化、肝炎、肠胃癌、神经管损伤、内胚窦瘤、生殖系统癌症等疾病的诊断及病情监控也具有重要意义。

中国是个人口大国，产前诊断与每个家庭都息息相关；同时，中国又是一个肝癌高发地区，每年死于肝癌的人数占全世界的40％以上，由于中晚期肝癌基本无有效治疗方法，所以对原发性肝癌特异性肿瘤抗原hAFP血液浓度的全民普查和早期诊断是解决肝癌高死亡率问题的最有效措施。因此，提供灵敏、特异、准确、简便、低成本的血清hAFP检测方法迎合了社会的迫切需要。

人甲胎蛋白(hAFP)作为原发性肝癌最特异的肿瘤标志物和产前诊断监测分子，其单克隆抗体具有极其重要的实际应用意义。虽然国内外均已成功制备了抗hAFP单抗，但其大多数并不具备临床应用价值，无法用于试剂盒研发和生产。在国内外现售的hAFP检测ELISA试剂盒产品中，线性检测范围均在20-400ng/ml以内，其中进口试剂盒的整体品质明显优于国产产品，但其线性范围和灵敏度仍有待进一步提高。此外，由于血清中成分复杂易出现假阳性，hAFP浓度变化范围极大(5ng/ml-10mg/ml)，故在实际检测应用中均采用双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)两步法以提高检测准确度和稳定性，该方法要求用于配对的捕获抗体和检测抗体都具有很高的亲和力和好的特异性，且形成“抗体1-抗原-抗体2”复合物时空间位置距离越远配对效果越好，故不断开发具有更高灵敏度、更好线性检测范围的双抗体夹心配对抗体是试剂盒研发的努力方向，也是临床检测的需要。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供能特异性结合人甲胎蛋白不同表位的单克隆抗体，并建立双抗体夹心Elisa方法对人血清中的甲胎蛋白进行检测。

本发明的目的是提供一组靶向人甲胎蛋白(human alpha fetoprotein，hAFP)不同表位的鼠源性单克隆抗体，要求抗体能高亲和力、高特异性的结合人甲胎蛋白，并形成双抗体夹心模式，从而能够对人甲胎蛋白进行定量检测。

本发明的目的在于提供一种检测甲胎蛋白的单克隆抗体。

本发明的另一目的在于提供一种检测甲胎蛋白的试剂盒。

本发明所采取的技术方案是：

一种高特异性高亲和力结合人甲胎蛋白的单克隆抗体，该单克隆抗体为Ab1、Ab3或Ab4，单克隆抗体Ab1、Ab3或Ab4的可变区基因均包括重链可变区和轻链可变区；

所述单克隆抗体Ab1重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示；