[发明专利]一种快速检测细菌多粘菌素耐药基因mcr‑1的LAMP引物组、试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种快速检测细菌多粘菌素耐药基因mcr-1的LAMP引物组，其包括一对内引物、一对外引物和一对环引物，其核苷酸序列分别如下所示：

内引物1：5’- GCGATGGGATAGGTTTGGCTGTGTTGCCGTTTTCTTGAC-3’；

内引物2：5’- TGCTGACGATCGCTGTCGGCACATAGCGATACGATGAT -3’；

外引物1：5’- TGATGCAGCATACTTCTGTG -3’；

外引物2：5’- GACCGTGCCATAAGTGTC -3’；

环引物1：5’- AAGGTAAGATTGGCGGTCG -3’；

环引物2：5’- CTACTGATCACCACGCTGTT -3’。

2.一种快速检测细菌多粘菌素耐药基因mcr-1的试剂盒，其特征在于：包括权利要求1所示的LAMP引物组。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：LAMP引物组中，内引物、外引物、环引物的摩尔比为：(6～8)：(1～2)：(3～4)。

4.根据权利要求2所示的试剂盒，其特征在于：还含有DNA聚合酶、LAMP反应液、显色剂、阳性对照和阴性对照。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：DNA聚合酶为Bst DNA聚合酶。

6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：LAMP反应液含有：10 mM dNTP、10×ThermoPol反应缓冲液、150 mM MgSO₄水溶液、5 mM 甜菜碱，四者的体积比为(6～8)：（4～5）：（2～3）：（8～10）。

7.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：显色剂为SYBR GREENⅠ。

8.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，阳性对照为含有细菌多粘菌素耐药基因mcr-1片段的质粒，阴性对照为DEPC水。

9.一种快速检测细菌多粘菌素耐药基因mcr-1的方法，包括如下步骤：

（1）提取待检样品DNA；

（2）利用LAMP引物组对待检样品DNA进行等温基因扩增反应；

（3）结果判断：反应结束后，在反应管中加入1～2µL显色剂，混匀后即可观察反应液的颜色：若呈现绿色，判定为阳性，若呈现橙色，判定为阴性；

上述方法所用的引物与试剂如权利要求1～8任一项所述；

上述方法用于非疾病的诊断与治疗。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：等温基因扩增反应的25μL反应体系含有：内引物各8 pmol/µL，外引物各1 pmol/µL，环引物各4 pmol/µL，反应液 12.5µL，DNA聚合酶8U，待检DNA 1～100 ng，用灭菌去离子水补齐到25µL；等温基因扩增反应的条件为：60～65℃反应55～65min。