[发明专利]一种肿瘤坏死因子舌下给药制剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于药物制剂领域，具体地说，涉及一种肿瘤坏死因子舌下给药制剂及其制备方法。

背景技术

肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factorα简称TNFα)是由激活的单核巨噬细胞产生的一种多功能细胞因子。人的有活性的TNFα由3个分子量为17KDa的非糖蛋白单体构成单体呈片层折叠结构，它们之间通过一个Cys69-Cys101间的二硫键非共价组成体。不同种属哺乳动物来源的TNFα在一级结构上具有极高的同源性，在生物学活性上也无明显的种属特异性。纯化的TNFα等电点在5.3左右；pH6-8时稳定；对酸敏感：对蛋白水解酶(胰蛋白酶、糜蛋白酶等)敏感；50％的饱和硫酸铵可使其沉淀。在反复冻融和无保护剂时，室温下失活。

TNFα基因为单拷贝基因。人的基因大小为2.67kb，定位于人第6号染色体。基因组由4个外显子和3个内含子组成；编码一个由233个氨基酸组成的前体蛋白、其前76个氨基酸为信号肽、使TNFα前体能跨膜存在于细胞膜上，通过降解后，分出含157个氨基酸的成熟蛋白、糖基化。人TNFα基因第1外显子编码81％的信号肽，第4外显子编码89％成熟型TNFα氨基酸序列。

用TNFα对肿瘤作临床的免疫治疗是几十年来发展较快的新型抗瘤疗法、对临床手术、放疗、化疗等常规手段是有效补充。这在美国、日本和德国都取得了较好的进展。美国的Genentech公司在临床试验中用TNFα治疗乳腺癌、肺癌、结肠癌等方面居于领先地位；Cetus公司把TNFα和IL-2联用开创了复合生物反应调节剂法。日本的重组产品已进入临床试验，对胸、腹水晚期转移癌、大肠癌、胆囊癌等取得了好的进展。德国BASF公司年产可达500g，德国用TNFα在胃肠道肿瘤、肝癌、卵巢肿瘤、乳腺癌等方面取得了成功，尤其在控制癌性胸腹水方面的疗效居世界前列。我国卫生部1998年初已批准上海、西安的5家单位开始临床试验。

临床上给药途径早年多为静脉、肌肉和皮下注射，近年来为了减轻TNFα的毒性，常采用局部注射或局部灌注方法，治疗中、晚期肿瘤。给药量从10μg/m²到400μg/m²。较多的治疗方案是2周为1疗程，每个疗程中连续5天给药，每天给50μg/m²。给药量主要取决于药效，通常80万单位/m²有效。

虽然1975年已分离、纯化了TNFα，并阐明了结构，1985年已经用大肠杆菌基因工程达到了TNFα的重组产品；但是至今TNFα还停留在临床阶段，世界各国的医药行政部门都未批准TNFα作为商品药在市场上出售。这主要由于从最初的临川试验时发现，TNFα有严重的全身毒性作用，对人的毒性作用要比小鼠高20倍。

这种毒性作用主要表现在：发热(35-100％)，寒颤(70-100％)，恶心头痛(20-70％)。乏力(20-77％)、食欲下降(24-46％)；还发生腹泻、血小板降低、白细胞减少、GTP上升、体液潴留、肌痛，甚至内毒素性休克。这就大大限制了TNFα的临床应用剂量，严重影响其治疗肿瘤的效果。

至今能选择性地、又直接杀伤肿瘤的药物很少，癌症的死亡率仍高于其他各种疾病。TNFα被发现后大家对其抱有极大的希望。但全身毒性的严重性，限制了它的应用。十几年来各国学者正在千方百计降低TNFα的毒性，主要从两方面取得了一些进展：第一方面是改变给药途径，1990年前后，美国曾经试验用基因治疗，即把TNFα直接注入肿瘤组织。第二方面是用蛋白质工程技术对TNFα的结构进行改造，改造的目的是降低毒性和提高抗肿瘤。十几年来已突变成功了数十种TNFα，其中有些毒性有明显得下降，而抗肿瘤活性有显著提高。虽然如此，各国仍然还在作临床试验。

针对目前存在的上述问题，CN00109459.9公开了一种人肿瘤坏死因子α口服剂，含有表达人肿瘤坏死因子α(hTNFα)的念珠藻，降低了毒性，并可直接作用于消化道。

本申请人研发的注射用改构重组人肿瘤坏死因子(商品名：天恩福)为国家食品药品监督管理局(SFDA)批准的国家生物制品I类新药，是在肿瘤坏死因子原液中加入人血白蛋白和甘露醇经冻干得到的白色疏松粉末，主要用于治疗恶性淋巴瘤、肺癌、恶性黑色素瘤、恶性胸腹水，具有广阔的应用前景。然而，在长期的使用中发现其毒副反应大，稳定性不好。

有鉴于此特提出本发明。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于克服现有技术的不足，提供一种肿瘤坏死因子舌下给药制剂及其制备方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：