[发明专利]一种肝素钠的提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及农副产品深加工技术领域，具体涉及一种肝素钠的提取方法。

背景技术

肝素钠是带强负电荷的粘多糖，平均分子量为15000道尔顿，用于防治血栓形成或栓塞性疾病；各种弥漫性血管内凝血；也用于血液透析、体外循环、导管术、微血管手术等操作中及某些血液标本或器械的抗凝处理。肝素钠粗品是纯化肝素钠的原料，由猪、羊的小肠肠粘膜或牛肺提取而得。

目前肝素钠粗品提取生产工艺都采用酶解---树脂吸附法，行业平均出品率一般在1600-1680条猪小肠提取一个亿单位(不含肠皮)，工艺流程主要分为酶解、树脂吸附、洗涤洗脱、酒精沉淀、脱盐干燥等工序。其中酶解工序是整个流程中的重要工序，酶解程度的大小是决定出品率高低的关键因素。传统的采用碱性蛋白酶进行酶解的过程大多是加入碱性蛋白酶后直接升温至50～55℃后完成一次酶解，直接进行过滤和吸附收集肝素钠，每条猪小肠平均可酶解解离出66000USP单位的肝素钠(平均质量1.25kg，平均长度19米-19.5米的健康猪小肠，下同)，酶解折合出品率1600～1700条/亿单位。而理论上每条猪小肠(不含肠皮)含72000-75000USP单位的肝素钠，其酶解解离回收率为90％-92％，还有8％-10％的肝素未解离出来。

为了提高肝素钠的产率，出现了一些针对酶解过程的研究和改进，如中国专利CN10600875A和CN104448049A均公开了采用二次酶解的方式从猪肠衣中提取肝素钠，但是上述公开的二次酶解过程中对于酶解温度、盐度等的控制不够合理，使得对于肝素钠产率的提升不够显著。因此，需要研究开发出一种新的方法，进一步的提高肝素钠的提取效率。

发明内容

为了克服现有技术的缺陷，本发明的目的是提供一种肝素钠的提取方法，提高从猪小肠提取肝素钠的产率。

为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：

一种肝素钠的提取方法，包括以下操作步骤：

1)一次酶解：将准备好的猪肠黏膜原料加入盐度为4.0～4.5度的氯化钠水溶液中，混合均匀，得混合液，加入pH调节剂调节混合液的pH值，并将混合液升温至33±2℃后，加入碱性蛋白酶，持续升温至38±2℃后恒温保持酶解1～1.5小时，完成第一次酶解；

2)二次酶解：第一酶解结束后，加入pH调节剂调节混合液的pH值，调节混合液的盐度为3.0～3.5度，持续升温至55±1℃后，恒温保持酶解2.5～3小时，完成第二次酶解；

3)蛋白质变性：第二次酶解结束后，持续升温至81±1℃，除去上层杂质，保温，过滤，得酶解液；

4)将步骤3)制备的酶解液依次经过吸附、洗涤、洗脱、沉淀、脱水脱盐、干燥，即完成。

可选的，步骤1)和步骤2)中调节混合液的pH值为9.0±0.2。

进一步的，步骤1)第一次酶解过程中和步骤2)第二次酶解过程中保持混合液的pH不低于8.2。

进一步的，步骤1)和步骤2)中采用实时监控和补加pH调节剂的方式保持混合液的pH值不低于8.2。

可选的，步骤1)第一次酶解过程中采用实时监控的方式控制酶解过程的温度不低于35℃；步骤2)第二次酶解过程中采用实时监控的方式控制酶解过程中的温度不低于52℃。

上述对pH和温度的实时监控具体为每20～30分钟测定一侧pH值和温度。

上述盐度采用波美比重计测定。

可选的，步骤1)中碱性蛋白酶的加入量为每条猪肠对应加入4～4.5g碱性蛋白酶。

进一步的，所述碱性蛋白酶为胰蛋白酶或糜蛋白酶。

可选的，所述pH调节剂为2.2～2.5mol/L的氢氧化钠溶液。

可选的，步骤2)中所述氯化钠水溶液的质量百分浓度为3.0～3.5％。

可选的，步骤3)中保温时间为10～15分钟。

可选的，步骤4)所述吸附为将步骤3)制备的酶解液降温至56±2℃后，调整酶解液的pH＝8.5±0.2，盐度＜4度，加入吸附树脂，搅拌吸附。

可选的，所述吸附树脂的加入量为每条猪肠加入15～20g吸附树脂。

可选的，所述搅拌吸附的时间≥8小时，通常采用搅拌吸附过夜。完成吸附操作后的酶解液的pH值应为8.0±0.5，盐度应为3～4度。

可选的，步骤4)中所述洗涤为取吸附完成后的吸附树脂用热水清洗、沥干。吸附完成后的酶解液取出吸附树脂后作为废液按要求排放。