[发明专利]一种肝素钠的提取方法

权利要求书

1.一种肝素钠的提取方法，其特征在于，包括以下操作步骤：

1)一次酶解：将准备好的猪肠黏膜原料加入盐度为4.0～4.5度的氯化钠水溶液中，混合均匀，得混合液，加入pH调节剂调节混合液的pH值，并将混合液升温至33±2℃后，加入碱性蛋白酶，持续升温至38±2℃后恒温保持酶解1～1.5小时，完成第一次酶解；

2)二次酶解：第一酶解结束后，加入pH调节剂调节混合液的pH值，调节混合液的盐度为3.0～3.5度，持续升温至55±1℃后，恒温保持酶解2.5～3小时，完成第二次酶解；

3)蛋白质变性：第二次酶解结束后，持续升温至81±1℃，除去上层杂质，保温，过滤，得酶解液；

4)将步骤3)制备的酶解液依次经过吸附、洗涤、洗脱、沉淀、脱水脱盐、干燥，即完成。

2.如权利要求1所述的肝素钠的提取方法，其特征在于，步骤1)和步骤2)中调节混合液的pH值为9.0±0.2。

3.如权利要求1所述的肝素钠的提取方法，其特征在于，步骤1)中碱性蛋白酶的加入量为每条猪肠对应加入4～4.5g碱性蛋白酶。

4.如权利要求1所述的肝素钠的提取方法，其特征在于，步骤3)中保温时间为10～15分钟。

5.如权利要求1所述的肝素钠的提取方法，其特征在于，步骤4)所述吸附为将步骤3)制备的酶解液降温至56±2℃后，调整酶解液的pH＝8.5±0.2，盐度＜4度，加入吸附树脂，搅拌吸附。

6.如权利要求5所述的肝素钠的提取方法，其特征在于，所述吸附树脂的加入量为每条猪肠加入15～20g吸附树脂。

7.如权利要求1所述的肝素钠的提取方法，其特征在于，步骤4)中所述洗脱为在洗涤后的吸附树脂中加入2倍树脂量质量百分浓度为4％的氯化钠溶液中，在55±5℃温度下保温搅拌30～50分钟，完成一次洗脱，固液分离得一次洗脱液和一次洗脱树脂；在一次洗脱树脂中加入等倍树脂量的饱和氯化钠溶液，在55±5℃温度下保温搅拌4～5小时，完成二次洗脱，固液分离得二次洗脱液和二次洗脱树脂；在二次洗脱树脂中加入等倍树脂量的饱和氯化钠溶液，在55±5℃温度下保温搅拌1～1.5小时，完成三次洗脱，固液分离得三次洗脱液和三次洗脱树脂。

8.如权利要求1所述的肝素钠的提取方法，其特征在于，步骤4)中所述沉淀为合并一次洗脱液、二次洗脱液和三次洗脱液，得混合洗脱液，在混合洗脱液中加入乙醇至乙醇质量百分浓度为40～45％，搅拌30～50分钟，静置过夜分层，下层为肝素钠沉淀，固液分离得肝素钠粗品。

9.如权利要求1所述的肝素钠的提取方法，其特征在于，步骤4)中所述脱水脱盐为在肝素钠粗品中加入质量百分浓度为95％的乙醇溶液脱盐脱水2～3次。

10.如权利要求1所述的肝素钠的提取方法，其特征在于，步骤4)中所述干燥为将脱水脱盐后的肝素钠粗品在70～80℃条件下烘干。