[发明专利]一种低成本纯化九胜肽-1的方法

说明书

本发明公开了一种低成本纯化九胜肽‑1的方法，该方法采用高效液相色谱，先用反相聚合物柱对大批量的九胜肽‑1粗品进行纯化，除去九胜肽‑1粗品中的杂质，再用弱阴离子交换柱将三氟乙酸型九胜肽‑1转化成醋酸型九胜肽‑1。本发明纯化方法简单，不仅能得到纯度大于99％的九胜肽‑1，而且能达到九胜肽‑1成本低、收率高、产业化的要求。

技术领域

本发明属于多肽纯化技术领域，具体涉及一种九胜肽-1的纯化方法。

背景技术

九胜肽-1又名美立肽，为含有九个氨基酸的美白九肽，主要用于美白亮肤及祛斑。九胜肽-1是一种仿生肽，它和黑色素细胞上的MC1受体有非常好的匹配性，因此可以作为促黑色素细胞激素的对抗剂，竞争性的与MC1受体结合，阻止酪氨酸酶进一步被激活而产生黑色素。九胜肽-1竞争性的封闭黑素母细胞上受体与各种因子信号的入口，弱化了黑素母细胞的活性，减少黑素产生量，14天开始逐步均匀肤色，一个皮肤周期28天后，明显提亮肤色，呈现肌肤红润、白皙，因此九胜肽-1常被用作化妆品原料。

九胜肽-1作为化妆品原料时必须满足HPLC纯度≥99％，然而通过合成得到的九胜肽-1粗品中含有很多杂质，需要进一步提纯后才可以作为化妆品原料。传统纯化九胜肽-1的方法纯化效率低，得到的九胜肽-1纯度低，且所使用的流动相为乙腈，乙腈的用量大、价格昂贵。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于克服现有九胜肽-1纯化方法存在的缺点，提供一种成本低、纯度高，适合产业化的九胜肽-1纯化方法。

解决上述技术问题所采用的技术方案由下述步骤组成：

1、溶样

将九胜肽-1粗品溶解于蒸馏水中，用滤膜过滤，收集滤液。

2、粗纯

采用高效液相色谱法，用反相聚合物柱对滤液进行粗纯，填料为F型SBC MCI GEI反相色谱填料，流动相A为0.1mol/L三氟乙酸水溶液，流动相B为0.1mol/L三氟乙酸甲醇溶液，进行梯度洗脱纯化，流动相梯度选择A:B由(70～59):(30～41)到(45～40):(55～60)，收集粗纯后的九胜肽-1溶液，减压浓缩。

3、转盐

将步骤2得到的浓缩液用弱阴离子交换柱去除三氟乙酸，转换成醋酸型九胜肽-1，填料为DEAE高流速琼脂糖微球，流动相为体积浓度2％的醋酸水溶液，收集醋酸型九胜肽-1溶液，减压浓缩，得到纯度大于99％的醋酸型九胜肽-1。

上述步骤1中，优选九胜肽-1粗品与蒸馏水的质量体积比为1g:15～50mL。

上述步骤2中，流动相梯度优选0到10分钟A:B由70:30到59:41，15到40分钟A:B由45:55到40:60。

上述步骤2中，所述F型SBC MCI GEI反相色谱填料的粒径是30～50μm。

上述步骤3中，所述DEAE高流速琼脂糖微球的粒径是50～160μm。

上述步骤2和3中，所述流动相的流速优选4～10mL/分钟，上样和洗脱的柱温优选35～45℃。

本发明具有如下有益效果：

1、本发明方法打破了直接运用反相高效液相色谱法进行反复纯化的传统多肽纯化方法，将反相聚合物柱与弱阴离子交换柱结合使用，先对九胜肽-1进行粗纯，除去了大部分杂质，再用弱阴离子交换柱进行脱盐，将三氟乙酸型九胜肽-1转换成醋酸型九胜肽-1，并进一步纯化了多肽，极大地提高了纯化效率。

2、本发明方法粗纯过程中使用三氟乙酸水溶液和三氟乙酸甲醇溶液做为动相，甲醇用量少且价格低廉，对环境污染小，节省了整个纯化过程中流动相的成本，且纯化工艺较为环保。