[发明专利]一种水稻悬浮单细胞培养基及水稻单细胞的制备方法

说明书

本发明提供了一种用于水稻悬浮单细胞培养的AA培养基，本发明培养基中，通过向基本培养基AA中加入丁香酚等激素，能够提高所培育水稻悬浮细胞的增殖速度。同时，本发明还提供了一种水稻悬浮单细胞的制备方法，本发明方法中，通过使用本发明中所述添加有丁香酚等特殊激素小分子化合物成分的基本培养基AA，从而提高了水稻悬浮单细胞的培养速度，同时也提高了制备水稻悬浮单细胞的效率。同时，本发明方法能用于粳米和籼米等不同种类水稻单悬浮细胞的制备，并且都能够实现单细胞的高效培养。因此，本发明方法具有适用范围广，单细胞培养效率高等优点。

技术领域

本发明涉及单细胞培养领域，具体而言，涉及一种水稻悬浮单细胞培养基及水稻单细胞的制备方法。

背景技术

悬浮单细胞是用来研究污染物对细胞制毒机制的重要试验材料，同时可用来制备原生质体，并进一步开展植物基因组、蛋白质组等操作研究，是一种重要的基础实验材料。

制备悬浮单细胞难度较大，同一种作物的不同品种间制备悬浮单细胞的难易程度差异就很大。以水稻为例，粳稻的单细胞制备相对较容易，而籼稻品种则很难制备单细胞悬浮液。同时，现有技术中，制备水稻悬浮单细胞的培养时间也比较长，一般需要2－3个月的时间才能完成单细胞的培养，不仅耗时，也导致单细胞培养的成本升高。因此，开发一种能够针对不同品种的水稻进行有效悬浮单细胞培养，并且能够实现单细胞快速培养的方法，并提供一种能够提高愈伤组织增殖速度的培养液，也就成了目前亟待解决的技术问题。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种水稻悬浮单细胞培养基，通过在单细胞培养过程中使用添加有丁香酚等特殊激素小分子化合物成分的基本培养基AA，从而能够水稻悬浮单细胞的增殖速度，同时也提高了制备水稻悬浮单细胞的效率。

本发明的第二目的在于提供一种水稻悬浮单细胞的制备方法，所述的方法中通过改进培养基成分，在基本培养基AA中加入丁香酚等激素成分，从而使得本发明方法能够在较短的时间内制备得到多种水稻品种的悬浮单细胞，进而可以解决现有技术中方法适用面窄，耗时多而且成本高的技术问题。本发明方法能够适用于多种水稻品种悬浮单细胞的制备，并且能够缩短了悬浮单细胞制备的时间，具有应用范围广、悬浮单细胞制备速度快等优点。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

本发明提供了一种用于水稻悬浮单细胞培养的AA液体培养基，所述培养基是由2，4－D，KT(激动素)，丁香酚以及蔗糖溶解于基本培养基AA中而制成的。其中，丁香酚在所述培养基中的浓度为0.1－1mg/L。

本发明培养基中，通过向基本培养基AA中加入丁香酚等激素成分，从而能够促进愈伤组织增殖，并进一步提高单细胞的制备速度。

可选的，本发明所述AA液体培养基中各组分浓度为：2，4－D 1－5mg/L；KT 0.1－1mg/L；丁香酚0.1－1mg/L；蔗糖15－40g/L。

同时，本发明还提供了一种水稻悬浮单细胞的制备方法，其包括如下步骤：

将水稻种子去壳后预培养，然后切胚诱导愈伤组织培养，然后将得到的愈伤组织进行继代培养基；

选取继代培养的愈伤组织，并接种于AA液体培养基中，并将接种后的培养基进行超声振荡处理，然后进行震荡培养，即得到水稻悬浮单细胞；

其中，所述AA液体培养基是将2，4－D，KT(激动素)，丁香酚以及蔗糖溶解于基本培养基AA中而制成的。本发明方法中，通过使用添加有丁香酚等特殊激素小分子化合物成分的基本培养基AA，从而提高了水稻悬浮单细胞的培养速度，同时也提高了制备水稻悬浮单细胞的效率。同时，本发明方法适用于多种水稻悬浮单细胞的培养，适用范围广。

可选的，本发明中，所述水稻种子为粳稻种子或籼稻种子。