[发明专利]一种水稻悬浮单细胞培养基及水稻单细胞的制备方法有效
| 申请号： | 201611197452.9 | 申请日： | 2016-12-21 |
| 公开（公告）号： | CN106754630B | 公开（公告）日： | 2019-10-01 |
| 发明（设计）人： | 黄永春;李文华;张长波;黄益宗 | 申请（专利权）人： | 农业部环境保护科研监测所 |
| 主分类号： | C12N5/04 | 分类号： | C12N5/04;C12N5/02 |
| 代理公司： | 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙) 11371 | 代理人： | 毕翔宇 |
| 地址： | 300000*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 悬浮单细胞 水稻 制备 基本培养基 培养基 丁香酚 水稻悬浮细胞 单细胞培养 激素小分子 高效培养 悬浮细胞 粳米 籼米 增殖 激素 培育 | ||
1.一种用于水稻悬浮单细胞培养的AA液体培养基，其特征在于，所述培养基是由2,4-D，KT，丁香酚以及蔗糖溶解于基本培养基AA中而制成的；
所述AA液体培养基中，2，4-D的浓度为1-5 mg/L，KT的浓度为0.1-1 mg/L，丁香酚的浓度为0.1-1mg/L，蔗糖的浓度为15-40g/L。
2.一种利用权利要求1所述的AA液体培养基制备水稻悬浮单细胞的方法，其特征在于，其包括如下步骤：
将水稻种子去壳后进行预培养，然后切胚诱导愈伤组织培养，然后将得到的愈伤组织进行继代培养基；
选取继代培养的愈伤组织，并接种于权利要求1所述的AA液体培养基中，并将接种后的培养基进行超声振荡处理，然后进行震荡培养，即得到水稻悬浮单细胞。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法还进一步包括将去壳后水稻种子用酒精消毒，并用次氯酸钠处理的步骤。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述次氯酸钠的浓度为0.05-0.3mol/L。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述预培养、诱导愈伤组织培养以及继代培养所用培养基均为添加有2,4-D、KT、蔗糖、琼脂的基本培养基LS；所述培养基中各组分浓度为：2,4-D 1-5mg/L，KT 0.05-0.3mg/L，蔗糖 20-50g/L，琼脂 5-15g/L。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述预培养、诱导愈伤组织培养以及继代培养所用培养基中；所述培养基中各组分浓度为：2,4-D 2.5-4.5mg/L，KT 0.10-0.15mg/L，蔗糖 30-40g/L，琼脂 7-12g/L。
7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述预培养、诱导愈伤组织培养以及继代培养的温度为20-30℃。
8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述超声振荡的时间为10-20min，振荡速度为60-120rpm。
9.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述震荡培养的温度为20-30℃。
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