[发明专利]一种具有抗肿瘤活性的白首乌内生菌、筛选方法及用途

说明书

本发明公开了一种具有抗肿瘤活性的白首乌内生菌YCTA‑2‑Z1，所述具有抗肿瘤活性的白首乌内生菌YCTA‑2‑Z1在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.13176。本发明提供了一种具有抗肿瘤活性的白首乌内生菌YCTA‑2‑Z1对人肝癌细胞SMMC‑7721的增值有较好的抑制作用，对人肺癌细胞A549、人骨肉瘤细胞143B的增殖有一定抑制作用，在制备抗肿瘤药物中具有良好的应用前景。本发明还公开了一种具有抗肿瘤活性的白首乌内生菌YCTA‑2‑Z1的筛选方法。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种具有抗肿瘤活性的白首乌内生菌、筛选方法及用途。

背景技术

传统中药白首乌，被历代医家视为养生防老的珍品。现代研究表明，白首乌具有显著的抗肿瘤功效。然而市场上流通的药材需通过大量采挖天然药用植物的块根而获取，此举受地理、季节和植物生长周期的限制。为保护现有野生药物资源，我们期望能够找到具有再生性，可持续发展，对其研究开发无“来源受限”、“采收过度”等问题的困扰的新药用资源。

白首乌内生菌与宿主长期共存，与宿主植物具有相同或相似的活性成分，是一种新颖微生物资源，在医药领域具有潜在的应用前景和研究价值。所以，有必要分离筛选出一种具有抗肿瘤活性的白首乌内生菌。

发明内容

本发明的目的是提供所述具有抗肿瘤活性的白首乌内生菌，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.13176，保藏日期为2016年10月21日，该白首乌内生菌YCTA-2-Z1具有抗肿瘤活性。

本发明还提供了一种具有抗肿瘤活性的白首乌内生菌YCTA-2-Z1的筛选方法，包括以下步骤：

步骤1，取新鲜的白首乌根，自来水冲洗30min，吸水纸吸干白首乌根表面的水分，无菌水冲洗3次，每次冲洗2min，无菌滤纸吸干白首乌根表面的水分，得到干净的根系，备用；

步骤2，将干净的根系用75％乙醇浸泡5min，然后无菌水冲洗3次，得到醇处理根系；

步骤3，将醇处理根系用3g/100mL的NaClO₃溶液浸泡3min，无菌水冲洗 5次，得到消毒根系；

步骤4，将消毒根系切成0.5cm×0.5cm×0.5cm的小块，放置于PDA固体培养基上28℃培养3-7天；

步骤5，当组织块边缘有菌丝长出后，用接种针挑取少许菌落边缘的菌丝，划线接入到新的PDA固体培养基中，28℃培养，直至得到单一菌落；

步骤6，将步骤5中挑取的单一菌落划线接入到新的PDA固体培养基中， 28℃培养，直至得到单一菌落；

步骤7，重复上一步骤5-6次，直至分离得到具有抗肿瘤活性的白首乌内生菌YCTA-2-Z1。

本发明还提供了一种具有抗肿瘤活性的白首乌内生菌YCTA-2-Z1在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明提供了一种具有抗肿瘤活性的白首乌内生菌YCTA-2-Z1对人肝癌细胞SMMC-7721的增值有较好的抑制作用，对人肺癌细胞A549、人骨肉瘤细胞 143B的增殖有一定抑制作用，在制备抗肿瘤药物中具有良好的应用前景。

生物材料保藏信息说明

1、具有抗肿瘤活性的白首乌内生菌YCTA-2-Z1，已于2016年10月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.13176，北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101，分类命名为小不整球壳菌(Plectosphaerella cucumerina)。

附图说明

图1为本发明内生菌YCTA-2-Z1菌落形态图。