[发明专利]一种重组蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及分子生物学领域，尤其涉及一种重组蛋白及其制备方法和应用，具体涉及翡翠贻贝足丝蛋白基因的体外重组表达技术及其功能鉴定，所述重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明通过转录组技术和蛋白质谱技术相结合的方法制备得到一个翡翠贻贝足丝重组蛋白Pvfp6，所述翡翠贻贝足丝重组蛋白Pvfp6的氨基酸分子量为13.25kDa，等电点为6.48，该重组蛋白对重金属离子Cd具有有效的富集作用，在治理重金属或是放射性污染的水体具有潜在的应用价值。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，尤其涉及一种重组蛋白及其制备方法和应用，具体涉及翡翠贻贝足丝蛋白基因的体外重组表达技术及其功能鉴定。

背景技术

重金属是对生态环境危害极大地一类污染物，因其进入环境后不能被生物降解，而往往参与食物链循环并最终在生物体内积累，破坏生物体正常生理代谢活动，危害人体健康。重金属离子很难通过化学或是物理的方法去除或是被降解，尤其是在废水中低浓度的重金属离子，一些微生物、动物或植物对重金属毒性具有独特的抗性机制，使得利用它们清除水体中的重金属离子成为一种可行的方法。越来越多的研究表明，不同的金属结合蛋白(如MT和PC)，在生物忍耐和降解过量重金属毒性机制中起着重要作用。

尤其，金属硫蛋白(MTs)是一类低分子质量的富含半胱氨酸，能够有效富集重金属离子的蛋白质，它们通过半胱氨酸残基上的巯基与重金属结合形成无毒或低毒的络合物，从而清除重金属的毒害作用。CN 101781653 A公开了一种枣树金属硫蛋白基因及其在处理重金属污染重的应用，是实现生物回收重金属和质粒重金属污染的有效手段。

还有其他的蛋白也具有富集重金属的功能，CN 102924602 A公开了一种金离子吸附蛋白及富集并回收金离子的方法，该金离子吸附蛋白包含大肠杆菌外膜蛋白A片段和金离子结合蛋白GolB片段；或者包含金离子诱导蛋白片段和antigen43片段，该金离子吸附蛋白环境友好，不会对环境造成影响，能高效吸附多种重金属中的金离子。

翡翠贻贝是营足丝附着生活的滤食性双壳软体动物，因其摄食和附着的生活方式，体内容易富集重金属等污染物，能够反映所在水域的环境变化状况，被认为是最好的检测重金属污染指标的环境指示生物。

蒋臻等在“翡翠贻贝足丝粘附蛋白Pvfp-1粘附功能及其应用的研究”的博士论文中指出，应用基因工程方法获得翡翠贻贝足蛋白Pvfp-1及其几种缺失突变体。并分析对比这些缺失突变体的粘附功能，并进而探讨其粘附机理的基础上，设计合成了同样源于Pvfp-1序列的多肽。但其翡翠贻贝足蛋白Pvfp-1并没有富集重金属的能力。

翡翠贻贝能够分泌足丝，使其附着于礁石，营固着生活，而活体贻贝足丝具有较强的富集重金属离子或放射性物质的能力，离体的足丝通过变性处理以后，依然具有较强的富集能力。因此开展翡翠贻贝足丝富集重金属机制的研究，为治理重金属污染水体寻找更科学的途径，具有十分重要的理论与实践意义。

发明内容

针对目前存在的问题，本发明提供一种重组蛋白及其制备方法和应用，利用体外重组表达技术获得了翡翠贻贝足丝Pvfp6蛋白，该重组蛋白对重金属离子Cd具有有效的富集作用，在治理重金属或是放射性污染的水体具有潜在的应用价值。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种重组蛋白(Pvfp6蛋白)，所述重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

所述SEQ ID NO.1(重组Pvfp6蛋白)所示的氨基酸序列如下：MISAVCIYFFLVGQIQAGVY IPYEKPGQCP VTRGITPCVC IPENFECRFD SNCPGAMKCC DFGCGCNKRC PPVPSPLQCYYNGQYYPIGA HFPSVDGCNT CYCNDDGTVM CTLKACGYGYK.

根据本发明，所述重组Pvfp6蛋白的分子量为13.25kDa，等电点为6.48。