[发明专利]一种提高绒促性素效价的方法

说明书

技术领域

本发明属于医药生产领域，具体地说明运用三次层析技术来纯化绒促性素的方法。

背景技术

绒促性素是从孕妇尿中提取的一种生物活性物质，具有促进胚胎发育、维持妊娠的功能。绒促性性素与促甲状腺激素、促卵泡激素、黄体生成素等同为糖蛋白激素家庭一员。在临床上，绒促性素能治疗习惯性流产和促卵泡激素分泌过多或黄体生成素分泌不足引起的不孕症等疾病。此外，在水产养殖和畜牧业生产上也有广泛应用。绒促性素是我国的主要出口生化药物，用于纯化绒促性素的方法有很多，但现行方法工艺流程较繁琐、绒促性素产品效价较低。

发明内容

本发明提供了一种利用三次层析来纯化绒促性素的方法。该方法优化了纯化工艺，使纯化过程简单，收率明显提高，效价高于现有工艺。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案予以实现：

一种提高绒促性素效价的方法，其特征在于：采用三次层析进行纯化，所述三次层析依次为亲和层析、疏水层析和离子交换层析，最终得到高纯度绒促性素固体。

在发明的技术方案中，还具有以下技术特征：包括如下步骤：

（1）预处理：绒促性素粗品溶于溶解液中，加入乙醇溶液至混合溶液中存在低浓度乙醇后沉淀、取上清液，所述上清液再加入乙醇溶液至混合溶液中存在高浓度乙醇，取沉淀得固体；

（2）第一步层析：步骤（1）得到的固体进行capto blue（high sub）亲和层析得蛋白溶液A；

（3）第二步层析：步骤（2）得到的蛋白溶液A经Phenyl Sepharose 6 Fast Flow（high sub）疏水层析得蛋白溶液B；

（4）第三步层析：将步骤（3）得到的蛋白溶液B经DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析得蛋白溶液C；

（5）后处理：步骤（4）得到的蛋白溶液C加乙醇溶液至混合溶液中存在高纯度乙醇，沉淀后收集固体，即得绒促性素固体。

与现有技术相比，本发明的优点和积极效果是：

优化了纯化工艺，使纯化过程简单化，收率明显提高，效价高于现有工艺，另外设备占地面积缩小，车间耗能变小。本发明中，预处理后绒促性素的效价为300iu/mg左右，而经三次层析处理后绒促性素的效价可达9000iu/mg左右，效价显著提高。

具体实施方式

为了进一步了解本发明的技术特征，下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。

实施例1

（1）预处理：绒促性素粗品溶于溶解液中，再加入乙醇溶液至混合溶液中存在低浓度乙醇后沉淀、取上清液，所述上清液再加入乙醇溶液至混合溶液中存在高浓度乙醇，取沉淀得固体；

（2）第一步层析：步骤（1）得到的固体进行capto blue（high sub）亲和层析得蛋白溶液A；

（3）第二步层析：步骤（2）得到的蛋白溶液A经Phenyl Sepharose 6 Fast Flow（high sub）疏水层析得蛋白溶液B；

（4）第三步层析：将步骤（3）得到的蛋白溶液B经DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析得蛋白溶液C；

（5）后处理：步骤（4）得到的蛋白溶液C加乙醇溶液至混合溶液中存在高浓度乙醇，沉淀后收集固体，即得绒促性素固体。

实施例2

（1）预处理：绒促性素粗品溶于溶解液中，再加入乙醇溶液至混合溶液中存在低浓度乙醇后沉淀、取上清液，所述上清液再加入乙醇溶液至混合溶液中存在高浓度乙醇，取沉淀得固体；

（2）第一步层析：步骤（1）得到的固体进行capto blue（high sub）亲和层析得蛋白溶液A；

（3）第二步层析：步骤（2）得到的蛋白溶液A经Phenyl Sepharose 6 Fast Flow（high sub）疏水层析得蛋白溶液B；

（4）后处理：步骤（3）得到的蛋白溶液C加乙醇溶液至混合溶液中存在高浓度乙醇，沉淀后收集固体，即得绒促性素固体。

以上所述，实施例仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。