[发明专利]一种环介导等温扩增快速检测金藻的方法及试剂盒

权利要求书

1.环介导等温扩增引物组，其可特异性环介导等温扩增如SEQ ID No.7所示的分子标记；包括一对外引物，一对内引物和一对环状引物；所述外引物为F3和B3，其核苷酸序列如SEQ ID No.1-2所示；所述内引物为FIP和BIP，其核苷酸序列如SEQ ID No.3-4所示；所述环状引物为LF和LB，其核苷酸序列如SEQ ID No.5-6所示。

2.权利要求1所述引物组在环介导等温扩增技术快速检测金藻方法中的应用。

3.一种环介导等温扩增技术快速检测金藻的方法，其特征在于，以待测样品质粒和基因组DNA为模板，利用权利要求1所述的引物组进行环介导等温扩增反应。

4.根据权利要求3所述的环介导等温扩增技术快速检测金藻的方法，其特征在于，还包括步骤：将扩增产物进行凝胶电泳，如果出现特异性阶梯状条带，则判定样品中含有金藻，即为金藻阳性。

5.根据权利要求3所述的环介导等温扩增技术快速检测金藻的方法，其特征在于，所述环介导等温扩增反应的反应体系包括：8U/μL的Bst DNA聚合酶：1μL；10×的Bst DNA聚合酶缓冲液：2.5μL；25mmol/μL的MgSO₄：1.5μL；10mM 的dNTPs ：2.5 μL；5mol/L的Betain：4μL；10mM的F3/B3引物：0.5μL；20mM的FIP/BIP引物：1.5μL；10mM的LF/LB引物：1μL；模板：1μL；H₂O：6.5μL。

6.根据权利要求3或5所述的环介导等温扩增技术快速检测金藻的方法，其特征在于，所述环介导等温扩增反应的反应条件如下：65℃反应60 min，80 ℃反应7 min。

7.根据权利要求4所述的环介导等温扩增技术快速检测金藻的方法，其特征在于，所述凝胶电泳是使用质量体积比为2%的琼脂糖凝胶，恒压120V电泳30min。

8.权利要求1所述引物组在制备环介导等温扩增技术快速检测金藻试剂盒中的应用。

9.一种环介导等温扩增技术快速检测金藻试剂盒，其包括权利要求1所述引物组。

10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于：包括检测试剂和基因组DNA提取试剂。

11.根据权利要求10所述的试剂盒， 其特征在于：所述检测试剂包括：权利要求1所述的引物组、阳性标准品。

12.根据权利要求10所述的试剂盒， 其特征在于：所述基因组DNA提取试剂包括Roche的High Pure Template Preparation Kit试剂盒和Qiagen的DNeasy Plant Mini Kit试剂盒中的一种。