[发明专利]一种NMDA受体调控剂四肽衍生物的固相合成方法

说明书

本发明提供了一种NMDA受体调控剂四肽衍生物的固相合成方法，包括以下步骤：1)通过缩合偶联，并脱除氨基保护基，获得Thr‑固相合成树脂偶联物；2)通过三光气活化氨基酸，进行缩合偶联，得到BenzylPro‑Thr‑固相合成树脂；3)通过三光气活化氨基酸，进行缩合偶联，得到Pro‑BenylPro‑Thr‑固相合成树脂；4)通过缩合偶联，获得保护基‑Thr‑Pro‑BenylPro‑Thr‑固相合成树脂，脱除保护基并裂解固相合成树脂后得到NH₂‑Thr‑Pro‑BenylPro‑Thr‑CONH₂。本发明采用固化合成方法，并以三光气进行脯氨酸的活化，有效提高了缩合反应效率。

技术领域

本发明涉及生物制药领域，具体涉及一种四肽衍生物的制备方法。

背景技术

US20130035292A1中公开了一类NMDA(N-甲基-D-天氡氨酸)受体调控剂及其应用。NMDA受体是一类离子型谷氨酸受体的一种亚型，是由多亚基构成的异聚体，主要分布在中枢系统中。近年来的证据表明，组成NMDA受体的亚单位有着复杂的生理学和药理学特性，参与神经系统的多种重要生理功能。NMDA受体不仅与认知功能以及疼痛的感知相关，它的异常还会导致埃尔茨海默症、帕金森症、癫痫、脑缺血等多种疾病的发生，这为治疗性药物开发提供了靶点。TPPT四肽作为一类NMDA受体调控剂，能够特异性的结合NMDA受体的甘氨酸结合位点，影响NMDA受体的功能，因此在NMDA受体相关疾病的治疗领域具有潜在的应用价值。

现有技术中NMDA受体调控剂四肽衍生物的合成方法如下：以苏氨酸甲酯为起始原料，首先与Z-BenzylPro-OH在缩合试剂HATU/DIEA的作用下缩合，生成二肽粗品，用硅胶柱层析纯化；再使用Ac₂O/TEA保护二肽中苏氨酸侧链上的羟基，用硅胶柱层析纯化；在H₂，Pd/C作用脱除Cbz保护基；Z-Pro-OH与SOCl₂反应生成酰氯中间体Z-Pro-Cl，再与上述脱除氨基上Cbz保护的二肽反应生成三肽粗产物，用硅胶柱层析纯化；再次在H₂，Pd/C作用脱除Cbz保护基；Boc-Thr(Ac)-OH与IBCF在低温下反应生成酰氯中间体Boc-Thr(Ac)-Cl，再与上述脱除氨基上Cbz保护的三肽反应生成四肽，升温至室温反应19小时，将四肽上的保护基脱除；将四肽与MeOH-NH₃在封管中室温反应72小时，得到C端酰化的粗产物，使用制备型高效液相色谱仪纯化，得到TPPT四肽衍生物。

同时由于没有商品化的试剂，Boc-Thr(Ac)-OH需要通过三步反应得到：首先，Boc-Thr-OH在碱性条件下与BnBr反应将羧基转化成苄基酯；其次，使用Ac₂O/TEA保护苏氨酸侧链上的羟基，用硅胶柱层析纯化；最后，在H₂，Pd/C作用脱除苄基保护基。

在现有技术(US20130035292A1)中NMDA受体调控剂四肽衍生物是通过多步液相有机化学反应制备的，其中多个中间体需要经过柱层析分离，合成及纯化工艺复杂，总收率较低，并需要较长的时间，不利于放大生产。

目前NMDA受体调控剂四肽衍生物是通过多步液相方法制备的，与液相方法相比，固相多肽合成法无需繁琐的纯化工艺，更加方便、快捷，但是由于TPPT四肽衍生物序列中包含两个脯氨酸，其氨基和羧基的反应性均较差，因此难以应用常规的固相多肽合成试剂来高效的合成含有此类脯氨酸的酰胺建，因此，如何提高脯氨酸的反应活性，开发一种高效、快速制备TPPT四肽及其类似物的固相合成方法，是本发明要解决的技术问题。为了解决上述问题，本发明提供了上述专利中NMDA受体调控剂衍生物的制备方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种固相多肽合成方法，以廉价易得的氨基酸及缩合试剂为原料，以固相合成树脂为固相载体，高效、快速的合成目标四肽、经济地制备多种该类化合物的类似物。