[发明专利]一种绒促性素精品的制造方法

说明书

技术领域

本发明属于生物制药领域,具体地说是采用磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液制造绒促性素精品的方法。

背景技术

绒促性素是从健康孕妇尿中提取、精制而成的一种天然促性腺激素，具有类似黄体生成素的功能。对女性可促进卵泡的成熟及排卵，并维持黄体的功能。对男性，能刺激睾丸间质细胞的发育，增加雄激素分泌，促使睾丸下降和男性第二性征发育。与尿促性素合用，可模拟生理性的促黄体生成素高峰，而触发排卵。临床上绒促性素至今仍是治疗月经失调、无排卵性不孕症、先兆流产和习惯性流产、隐睾症、男性性功能低下等的首选药物。

国际上从20年代就开始研究，1927年Zondek和Ascbheim首先发现妊娠妇女尿中存在着促性腺激素，1936年Brown和Venning找到在妊娠第60-80天，尿中绒促性素分泌达到最高峰。

1928年Zondek和Ascbheim 首先用乙醇沉淀法，从孕妇尿中取得了活性物质，其它研究者则进行应用吸附剂从尿中直接吸附绒促性素的研究，这包括1932年Katzman和Doisy用苯甲酸吸附法，1943年Katzman等人用人造沸石层析吸附法，1954年Loraine和Brown用高岭土吸附法，1959年难波修一等人用离子交换树脂吸附法等，用这些方法所取得的绒促性素再用各种纯化方法进行纯化。

发明内容

本发明公开了采用磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液制造绒促性素精品的技术方法，它包括以下步骤：溶解、预过滤、超滤、纳滤、冻干。

1、溶解：温度8-12℃条件下，并且在此后的预过滤、超滤、纳滤步骤维持这个温度，用pH值7.0的0.1mol/L磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液溶解绒促性素粗品，比例为每kg绒促性素粗品加入15-25L pH值7.0的 0.1mol/L磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液，搅拌20-40分钟，得到绒促性素料液。

2、预过滤：将绒促性素料液用0.22μm滤芯预过滤，压力不超过0.2MPa，得到绒促性素过滤液。

3、超滤：将绒促性素过滤液用10KD超滤膜进行超滤浓缩，压力不超过0.1MPa，浓缩体积至原体积的15%-20%，得到绒促性素超滤液。

4、纳滤：将绒促性素超滤液用20nm的滤芯进行纳滤，压力不超过0.3MPa，得到绒促性素纳滤液。

5、冻干：将绒促性素纳滤液放入真空冷冻干燥机速冻至温度为-50℃，开始抽真空至真空度为-0.1MPa，继续维持制冷2-3小时，然后将制冷变为加热，缓慢加热使纳滤液温度上升至30-35℃时即得绒促性素精品。

所述制得的绒促性素精品：收率≥80%，效价≥6000IU/mg，25℃温度条件下存放6个月效价降低≤5%。

与现有技术相比，本发明的优点和积极效果是：

采用磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液制造绒促性素精品, 制造过程在低温条件下进行，能有效减少长期高温条件对绒促性素活性的影响；通过一系列过滤方式，显著降低杂质含量；制造的绒促性素精品，收率≥80%，效价≥6000IU/mg，25℃温度条件下存放6个月效价降低≤5%，外观、理化、微生物限度等指标均达到或超过国内外相关药品标准；方法工艺简单，生产成本低，产量高，可工业化生产。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。

实施例1

（1）温度8℃条件下，并且在此后的预过滤、超滤、纳滤步骤维持这个温度，1kg绒促性素粗品加入18L pH值7.0的0.1mol/L磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液，搅拌20分钟，得到绒促性素料液。

（2）将绒促性素料液用0.22μm滤芯预过滤，压力不超过0.2MPa，得到绒促性素过滤液。

（3）将绒促性素过滤液用10KD超滤膜进行超滤浓缩，压力不超过0.1MPa，浓缩体积至原体积的15%，得到绒促性素超滤液。

（4）将绒促性素超滤液用20nm的滤芯进行纳滤，压力不超过0.3MPa，得到绒促性素纳滤液。

（5）将绒促性素纳滤液放入真空冷冻干燥机速冻至温度为-50℃，开始抽真空至真空度为-0.1MPa，继续维持制冷2小时，然后将制冷变为加热，缓慢加热使纳滤液温度上升至30℃时即得绒促性素精品。

检测制得的绒促性素精品：收率86%，效价6470IU/mg，25℃温度条件下存放6个月效价降低2%。

实施例2