[发明专利]一种米糠抗氧化活性肽的分离制备方法

权利要求书

1.一种米糠抗氧化活性肽的分离制备方法，其特征在于，所述方法是通过碱提酸沉法和Osborne分级提取脱脂米糠来获得米糠谷蛋白，然后选用离子交换和凝胶层析技术对米糠谷蛋白进行分离纯化，再将分离纯化后的米糠谷蛋白用中性蛋白酶水解、离心、真空浓缩、冷冻干燥，之后利用离子交换层析、凝胶层析、制备RP-HPLC及分析型RP-HPLC分离纯化得到抗氧化活性肽，所述抗氧化活性肽的序列为KHNRGDEF；

所述中性蛋白酶水解的条件为[E]/[S]1.5%—1.8%、pH值为10.0、温度为50℃、反应时间为4.2h；所述方法具体包括如下步骤：

（1）谷蛋白的提取：脱脂米糠→加水并调pH值为9.0，料液比为1:10，所述料液比的单位为mL/g，40℃水浴4h→离心→取上清液→pH值为4.0条件下酸沉→离心→取沉淀→水洗，调pH值为7.0→冷冻干燥→碱提米糠谷蛋白→Osborne分级提取，得到米糠谷蛋白；

（2）选用pH值为10.0，浓度为0.1 mol/L 的Na₂CO₃-NaHCO₃作为缓冲液对米糠谷蛋白进行初步的分离；以pH值12.0，浓度为0.05 mol/L Na₂HPO₄-NaOH缓冲液溶解碱提米糠谷蛋白，利用 DEAE-52 阴离子交换层析介质对碱提米糠谷蛋白进行进一步分离纯化；

（3）制备米糠蛋白悬浮液，按中性蛋白酶/谷蛋白质量比为1.5%-1.8%的比例添加中性蛋白酶→调 pH 值为10.0→50℃下超级恒温水浴酶反应器中溶解 30min→酶解4.2h→灭酶→离心→取上清液→真空浓缩→冷冻干燥，得米糠谷蛋白肽；

（4）对米糠谷蛋白肽进行分离纯化后得抗氧化活性肽。