[发明专利]共转FPS和DBR2基因提高青蒿素含量的方法及制备的青蒿

权利要求书

1.一种提高青蒿中青蒿素含量的方法，其特征在于，将法尼基焦磷酸合酶FPS基因和青蒿醛Δ11(13)双键还原酶DBR2基因共转化青蒿，包括步骤：

1)采用基因克隆方法获得FPS基因和DBR2基因；

2)将所述FPS基因和DBR2基因连接于表达调控序列，形成含FPS基因和DBR2基因的植物双元表达载体，所述植物双元表达载体的构建包括如下步骤：分别将FPS基因和DBR2基因连接到中间载体上，经双酶切后将FPS基因和DBR2基因分别连入表达载体上，获得CaMV 35S-FPS-nos和CaMV 35S-DBR2-nos表达盒，通过无缝克隆技术将CaMV 35S-FPS-nos和CaMV35S-DBR2-nos表达盒连入另一表达载体中，获得所述植物双元表达载体；

3)将所述含FPS基因和DBR2基因的植物双元表达载体转化根癌农杆菌，获得用于转化青蒿的含FPS基因和DBR2基因的植物双元表达载体的根癌农杆菌菌株，采用冻融法将所述植物双元表达载体转化根癌农杆菌；

4)将含FPS基因和DBR2基因的植物双元表达载体的根癌农杆菌菌株转化青蒿，获得转基因青蒿植株，所述根癌农杆菌菌株转化青蒿，包括外植体培养，所述根癌农杆菌菌株与所述外植体的共培养，抗性再生植株的筛选，其中外植体培养中，当青蒿无菌苗长至1.8-2.2cm时，剪取无菌苗叶片外植体；

5)对获得的转基因青蒿中的青蒿素含量进行高效液相色谱-蒸发光散射检测器测定，获得青蒿素含量提高的转基因青蒿植株。

2.如权利要求1所述的提高青蒿中青蒿素含量的方法，其特征在于，所述FPS基因的序列如SEQ ID No.1所示，所述DBR2基因的序列如SEQ ID No.2所示。

3.如权利要求1所述的提高青蒿中青蒿素含量的方法，其特征在于，所述中间载体为pMD18T，所述表达载体为pCAMBIA1304，所述另一表达载体为pCAMBIA2300。

4.如权利要求1所述的提高青蒿中青蒿素含量的方法，其特征在于，高效液相色谱-蒸发光散射检测器测定包括：色谱柱C-18反相硅胶柱，流动相为甲醇：水，其中，甲醇：水的体积比为60：40，柱温30℃，流速1.0mL/min，进样量20μL，蒸发光散射检测器漂移管温度40℃，载气压力5bar。