本发明提供一种康乃馨DcU6启动子在CRISPR/Cas9基因编辑系统中的应用以及基因编辑方法。本发明第一方面提供一种康乃馨DcU6启动子在CRISPR/Cas9基因编辑系统中的应用,所述康乃馨DcU6启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO:1‑2所示。本发明使用康乃馨DcU6启动子提高CRISPR/Cas9基因编辑系统的编辑效率,可用于康乃馨CRISPR/Cas9基因编辑系统,并驱动sgRNA的高效表达,对实现康乃馨的育种具有重要意义。
本发明提供一种用于提高青蒿中青蒿素含量的植物表达载体、重组转化子、青蒿及其应用。本发明第一方面提供一种植物表达载体,所述植物表达载体包括编码转录因子AabHLH39的基因,编码所述转录因子AabHLH39的基因具有如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。本发明通过构建包含编码转录因子AabHLH39的基因的植物表达载体,并将其转化青蒿内,使青蒿过表达转录因子AabHLH39,以提高青蒿中青蒿素的含量。
本发明提供一种转基因青蒿以及提高青蒿中青蒿素含量的方法。本发明第一方面提供一种转基因青蒿,所述转基因青蒿能够表达ADS、CYP71AV1、DBR2、ALDH1、MsGSW2基因,所述ADS、CYP71AV1、DBR2、ALDH1、MsGSW2基因分别具有如SEQ ID NO.1‑4、6所示的核苷酸序列。本发明通过多基因组装技术,获得了转基因青蒿,能够有效提高青蒿腺毛密度以及青蒿素含量,为规模化生产青蒿素提供了一种理想方法。
本发明公开了一种青蒿TCP类转录因子AaTCP15及其应用,涉及基因工程技术领域,所述转录因子AaTCP15的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示,其编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明提供的青蒿TCP类转录因子AaTCP15,能够激活青蒿素生物合成关键酶基因DBR2和ALDH1的启动子,正向调控DBR2和ALDH1基因的表达,从而促进青蒿素的生物合成;并利用转基因技术将青蒿转录因子AaTCP15的过量表达载体或反义干扰载体转化青蒿,实现了对植株中青蒿素含量增高或降低的调控。本发明提供的转录因子AaTCP15及其应用对于青蒿中青蒿素含量的提高及青蒿的品质改良、培育高含量青蒿素新品种、青蒿素的规模化生产具有重要意义。
本发明公开了一种调控基因在非分泌型腺毛中表达的启动子及其应用,涉及基因工程技术领域,所述启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示;本发明还提供了该启动子的制备方法,含有该启动子的载体和表达盒。本发明提供的启动子能引导报告基因在植物非分泌型腺毛中特异表达,对利用植物非分泌型腺毛组织表达和生产代谢产物的基因工程育种具有重要意义。
本发明公开了一种核苷酸序列及其在提高植物分泌型腺毛密度中的应用,涉及植物基因工程技术领域,所述核苷酸序列选自如下序列:1)SEQ ID NO:1、3、5中任一项所示的核苷酸序列;2)SEQ ID NO:1、3、5中任一项所示的核苷酸序列通过一个或几个核苷酸的取代、缺失、或添加衍生产生的核苷酸序列;3)与SEQ ID NO:1、3、5中的任一项具有至少80%同源性的核苷酸序列。本发明通过基因工程手段将上述核苷酸序列中的任意一种转入植物体中,能够显著提高植物分泌型腺毛密度,充分发挥其在抗虫以及生产特定代谢物质上的潜力,具有极高的实际生产应用价值。
本申请公开了一种过氧化物酶POD1的编码序列,其特征在于,所述编码序列编码的氨基酸序列包括SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列或其功能性变体,所述功能性变体与SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列具有70%以上的同源性。本申请还公开了由过氧化物酶POD1的编码序列编码的多肽,所述多肽能够以二氢青蒿素为底物合成青蒿素,对于青蒿素的规模化生产具有重要作用。
本发明公开了一种提高青蒿中青蒿素含量的方法,所述方法包括如下步骤:将SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列导入所述青蒿中,得到含有所述核苷酸序列的再生转基因青蒿。本发明提供的核苷酸序列编码SPL家族转录因子(AaSPL9),利用转基因技术获得的再生转基因青蒿中青蒿素的含量明显提高,对青蒿素的规模化生产具有重要意义。
本发明公开了一种AaWBC1基因启动子,该启动子能调控AaWBC1基因在青蒿分泌型腺毛中特异表达,所述启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。同时本发明公开了一种AaWBC1基因启动子及其功能验证方法和应用。本发明提供的启动子能引导报告基因在植物分泌型腺毛中特异表达,对利用植物腺毛组织表达和生产代谢产物的基因工程育种具有重要意义。