[发明专利]一种鉴别蜂蜜中掺入淀粉类糖浆的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种鉴别蜂蜜中掺入淀粉类糖浆的方法，属于食品安全领域。

背景技术

蜂蜜掺假问题由来已久，但一直没有受到普通消费者的警惕。一方面，掺假蜂蜜本身对人体危害程度不及其它一些掺假食品；另一方面，检测方法的滞后，导致假蜂蜜横行泛滥。纯天然蜂蜜中掺入价格低廉的淀粉类糖浆（大米、玉米糖浆）是蜂蜜掺假中普遍存在的一种现象。淀粉糖浆是红薯、玉米等植物淀粉通过水解、脱色等工业手段加工而成的粘稠液体，其糖分组成为葡萄糖、低聚糖等。淀粉的水解在工业上称为转化，淀粉糖浆转化过程中通过采用不同的酸、酶或酸酶合并的工艺控制转化的葡萄糖和果糖的比例，因此与蜂蜜极为相似，从而达到以假乱真的程度。

目前鉴定蜂蜜中是否掺有淀粉类糖浆的方法包括稳定碳同位素法、薄层色谱法和离子色谱法。但是这些方法或多或少都有一定的缺陷。譬如，稳定碳同位素法无法检测出大米糖浆等C3植物糖浆；薄层色谱法测试周期长，同时由于薄层色谱法是以比对颜色深浅来判断是否含有淀粉类糖浆，因而主观性较大，容易产生较大偏差；采用离子色谱法分析，不仅前处理过程复杂，需要除去蜂蜜中的单糖，并富集寡糖，同时分析时间长、分离度和灵敏度低，结果由于受到蜂蜜中杂质干扰，检测结果不准确。

因而，本领域的技术人员一直在寻找一种灵敏、简便、准确的鉴别蜂蜜中掺入淀粉类糖浆的方法。

南京工业大学的熊晓辉等人在CN104749290A中公开了一种鉴别蜂蜜中淀粉糖浆掺假的高效液相色谱测定方法，其通过掺入淀粉糖浆的蜂蜜存在特征的低聚寡糖“指纹区”(DP6～13)及在麦芽六糖至麦芽七糖之间存在典型的“指纹峰”M，将其作为蜂蜜中掺入淀粉糖浆的判定指标。但是很快他们发现用于判定的“指纹峰” M 在处理低浓度掺假样品时保留时间易受到柱温、样品基质等影响发生漂移，不能准确的判定低掺假量的样品。于是，作为改进他们在CN104977369A公开了一种鉴别蜂蜜中淀粉糖浆掺假的液质联用（HPLC-MS/MS）测定方法。其中具体公开了以麦芽六糖至麦芽七糖之间存在的“指纹峰”M中两个特征子离子671m/z和689m/z为特征检测峰的液质联用测定方法。

但是，其始终没有在寡糖类物质中找到一种特定的标记物。我们知道，由于受到分离度和检测环境等因素的影响，即使采用相同的检测条件得到的液相图、质谱图也存在一定的差异。因而，熊晓辉等人公开的测定方法可能存在准确度不高、重现性不佳等问题。然而，如果能够以某一寡糖作为鉴别蜂蜜中掺入淀粉类糖浆的检测标记物，则可以根据不同的检测环境等利用标记物校正标准谱图、标准曲线，从而使得以这一标记物为基础的检测方法准确度更高、重现性更好。

那么，为什么在熊晓辉等人公开的基础上，本领域一直未有以某一特定寡糖为标记物的检测方法公开呢？

这是因为在寡糖测定中存在以下问题，一是寡糖在淀粉糖浆中含量较低，二是存在结构相似的碳水化合物和其它大量单糖的干扰。因此，现有技术一直无法实现淀粉类糖浆中五种寡糖（包括麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖）的有效分离和测定。因而，也就不存在可能，去考察单纯采用某一寡糖，是否能够准确判断蜂蜜中掺入淀粉糖浆。

发明内容

本发明的目的是找到一种简单、快速且具有高灵敏度的鉴别蜂蜜中掺入淀粉类糖浆的方法。

具体地，本发明公开了一种鉴别蜂蜜中掺入淀粉类糖浆的方法，该方法以高效液相色谱-四级杆静电场轨道阱高分辨质谱为检测手段，以麦芽七糖为特征检测标志物。

本发明以蜂蜜中的寡糖类物质作为靶标分析。通过对大量纯天然蜂蜜和糖浆样品的麦芽类寡糖物质分析，包括麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖和麦芽七糖共五种寡糖，发现淀粉类糖浆中含有的不被酶解完全的微量麦芽七糖,可以作为蜂蜜中是否掺入淀粉类糖浆的标识物，可有效解决蜂蜜中掺入淀粉类糖浆的鉴别检测问题。

进一步地，本发明公开了以麦芽七糖为标记物鉴别蜂蜜中掺入淀粉糖浆的具体方法，包括样品前处理、高效液相分离和质谱检测三个步骤。

具体的，在本发明中我们进一步公开：

（1）高效液相色谱分离条件如下，

色谱柱：Carbohydrate色谱柱；

流动相：A为0.1 %（v/v）甲酸水溶液，B为乙腈；

流速：1.2 mL/min；

梯度洗脱程序：0 -2 min 35% A, 2 -2.5 min 35-50% A, 2.5-8.0 min 50% A, 8.0-9.0 min 50-35% A，9.0-12.0min 35%A；

柱温：25℃；