[发明专利]改造的转铁蛋白DNA结合域、重组DNA聚合酶及制备方法有效
申请号: | 201610345512.0 | 申请日: | 2016-05-23 |
公开(公告)号: | CN107304424B | 公开(公告)日: | 2019-05-10 |
发明(设计)人: | 刘华华 | 申请(专利权)人: | 成都福际生物技术有限公司 |
主分类号: | C12N15/12 | 分类号: | C12N15/12;C12N9/12;C12Q1/6876 |
代理公司: | 北京方韬法业专利代理事务所(普通合伙) 11303 | 代理人: | 马丽莲 |
地址: | 610041 四川省成都市高新区科*** | 国省代码: | 四川;51 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 改造 铁蛋白 dna 结合 重组 聚合 制备 方法 | ||
1.一种改造的转铁蛋白DNA结合域,其特征在于,所述转铁蛋白为乳转铁蛋白LTF、血清铁传递蛋白TF、黑素转铁蛋白MTF或卵转铁蛋白OTF,所述各转铁蛋白的N端具有一段同源的DNA结合域;所述乳转铁蛋白LTF的DNA结合域采用人源,如SEQ ID No.1所示,或采用鼠源,如SEQ ID No.2所示;所述血清铁传递蛋白TF的DNA结合域采用人源,如SEQ ID No.3所示,或采用鼠源,如SEQ ID No.4所示;所述黑素转铁蛋白MTF的DNA结合域采用人源,如SEQ IDNo.5所示,或采用鼠源,如SEQ ID No.6所示;所述卵转铁蛋白OTF的DNA结合域采用鸡源,如SEQ ID No.7所示;
所述改造的转铁蛋白DNA结合域的氨基酸序列为:将所述DNA结合域中第10位的C换为R,第20位的C换为A或者G,使其不能形成二硫键。
2.根据权利要求1所述的改造的转铁蛋白DNA结合域,其特征在于,将所述DNA结合域第1-5位的氨基酸换为KFKYK和/或第28-31位换为KKVK。
3.一种重组DNA聚合酶的制备方法,其特征在于,采用权利要求1或2所述的改造的转铁蛋白DNA结合域与DNA聚合酶进行偶联,构建重组DNA聚合酶;
或采用权利要求1或2所述的改造的转铁蛋白DNA结合域中相同的DNA结合域或不同的DNA结合域串联在一起后再与DNA聚合酶偶联,构建重组DNA聚合酶;
或将上述构建的重组DNA酶与其他重组DNA聚合酶或未改造的DNA聚合酶混合后获得复合的重组DNA聚合酶。
4.根据权利要求3所述的重组DNA聚合酶的制备方法,其特征在于,所述DNA聚合酶为耐热DNA聚合酶或逆转录酶。
5.根据权利要求4所述的重组DNA聚合酶的制备方法,其特征在于,所述耐热DNA聚合酶为TaqDNA聚合酶。
6.根据权利要求3-5任一项所述的制备方法制备的重组DNA聚合酶。
7.一种PCR检测试剂盒,其特征在于,包含权利要求6所述的重组DNA聚合酶。
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