[发明专利]一种昆虫杆状病毒纯化方法

权利要求书

1.一种昆虫杆状病毒的纯化方法，其特征在于：将昆虫杆状病毒依次进行收集、差速离 心、裂解、微滤，得到纯化的昆虫杆状病毒液，包括如下步骤：

(1)收集感染病毒昆虫尸的初始杆状病毒液；

(2)将步骤(1)得到的初始杆状病毒液进行差速离心，收集上清液，得到粗提杆状病毒 液；

(3)将步骤(2)得到的粗提病毒液进行裂解，得到不含蛋白壳的杆状病毒液；

(4)将步骤(3)得到的杆状病毒液进行微滤，得到纯化的昆虫杆状病毒液。

2.如权利要求1所述一种昆虫杆状病毒的纯化方法，其特征在于：所述昆虫初始杆状病 毒液的收集方法为：将昆虫杆状病毒接种饲养的昆虫幼虫，待昆虫幼虫死亡后，加入研钵中 研磨，用双层纱布夹单层脱脂棉过滤，得到昆虫初始杆状病毒液。

3.如权利要求2所述一种昆虫杆状病毒的纯化方法，其特征在于：所述病毒接种的接种 剂量为1×10⁷PIB/虫-1×10⁸PIB/虫。

4.如权利要求2所述一种昆虫杆状病毒的纯化方法，其特征在于：所述饲养条件为27- 29℃，光周期L:D=16:8，湿度35-45%。

5.如权利要求1所述一种昆虫杆状病毒的纯化方法，其特征在于：步骤(2)中所述差速 离心的方法为：4℃、800-1000rpm、3-5分钟；4℃、10000-12000rpm、20-30分钟；重复上述步 骤3-10次。

6.如权利要求1所述一种昆虫杆状病毒的纯化方法，其特征在于：步骤(3)中所述病毒 裂解的方法为：将粗提病毒液以1:9-1:12的比例加入0.5%NaHCO₃中，室温静置20-30分钟。

7.如权利要求1所述一种昆虫杆状病毒的纯化方法，其特征在于：步骤(4)中所述微滤 方法为：用注射器取裂解病毒液与无菌的一次性针头式滤器连接，手动低速过滤。

8.一种昆虫杆状病毒的纯化方法，其特征在于：油桐尺蛾核型多角体病毒的纯化病毒 液制备，将在桉树上采集的油桐尺蛾4龄幼虫单条饲养于实验室培养瓶中，培养条件为28 ℃，光周期L:D=16:8，湿度40%；待幼虫饥饿24小时后，去除饲养瓶中粪便，用移液器饲喂油 桐尺蛾核型多角体病毒1×10⁷PIB/虫；待幼虫感病死亡后收集虫尸，在研钵中研磨虫尸后， 用双层纱布夹单层脱脂棉过滤，得到初始病毒液；然后将得到的初始病毒液进行差速离心： 先4℃、800rpm、3分钟；然后4℃、12000rpm、30分钟；重复上述步骤5次，得到粗提病毒液；最 后将粗提病毒液以1:10的比例加入0.5%NaHCO₃中，室温静置20分钟，分离得到裂解病毒 液；用5ml注射器取裂解病毒液再与无菌的孔径0.22μm，直径33mm的一次性针头式滤器连 接，手动低速过滤，所得病毒液即为纯化后的病毒液。