[发明专利]一种液体深层发酵法生产桦褐孔菌木质纤维素降解酶的工艺

权利要求书

1.一种液体深层发酵法生产桦褐孔菌木质纤维素降解酶的工艺，其特征在 于，包括如下步骤：

(1)菌种活化：以桦褐孔菌为菌种，接种至斜面菌种培养基上培养，获得 活化菌种；

(2)液体菌种培养：将活化菌种转入液体种子培养基中，摇床培养至对数 期得液体菌种；

(3)液体深层发酵：将液体菌种接入液体深层发酵培养基中发酵培养，液 体菌种与液体深层发酵培养基的体积比为1:8-10，所述液体深层发酵培养 基的配方为：玉米粉2-6g/L，木质纤维素基质40-48g/L，促进剂1.2-1.5g/L， 诱导剂5×10^-5-9×10^-5g/L，蛋白胨2.3-2.5g/L，酵母粉1.2-1.5g/L，KH₂PO₄0.8-1g/L，Na₂HPO₄0.2-0.4g/L，MgSO₄·7H₂O0.5-0.6g/L，pH值6.0；

液体深层发酵的工艺参数为：发酵温度27-28℃，发酵罐空气流量 0.5-1.0vvm，发酵罐内部压力0.1-0.25kg/cm³，搅拌转速70-150转/分钟， 发酵时间3-11天；

(4)桦褐孔菌木质纤维素降解酶制备：发酵结束后，将发酵产物过滤，获 得发酵液，在发酵液中加硫酸铵至硫酸铵的终浓度为20wt％，离心10-15 分钟后收集上清液，再往上清液中加入硫酸铵至硫酸铵的终浓度为80wt％， 离心15-25分钟后收集沉淀，沉淀溶解在醋酸-醋酸钠缓冲液中，透析，冷 冻干燥。

2.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于：步骤(3)中所述木质纤维 素基质选自小麦秸秆、水稻秸秆、玉米秸秆、桦树枝、椰子壳、山核桃壳、 竹屑、香蕉皮、石榴皮中的一种或几种。

3.根据权利要求1或2所述的工艺，其特征在于：步骤(3)中所述促进 剂为乙醇、聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、曲拉通、3-[(3- 胆固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸中的一种或几种。

4.根据权利要求1或2所述的工艺，其特征在于：步骤(3)中所述诱导 剂为没食子酸、(+)儿茶素、黎芦醇、2.2-连氮-3-乙苯-二噻唑-6磺酸、硫 酸铜中的一种或几种。

5.根据权利要求1或2所述的工艺，其特征在于：步骤(4)中醋酸-醋酸 钠缓冲液的浓度为20-25mmol/L。

6.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于：所述斜面菌种培养基的配方 为：麦芽浸膏40g/100mL，蛋白胨4g/100mL，琼脂10g/100mL，pH值为 5.4-5.6。

7.根据权利要求6所述的工艺，其特征在于：斜面菌种培养基上培养的参 数为：温度27-28℃，培养200-250小时。

8.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于：所述液体种子培养基的配方 为：葡萄糖5g/100mL，蛋白胨0.5g/100mL，酵母浸膏0.1g/100mL，KH₂PO₄0.1g/100mL，MgSO₄0.15g/100mL，CaCl₂0.01g/100mL。

9.根据权利要求8所述的工艺，其特征在于：液体菌种培养的参数为：温 度27-28℃，培养3.5-4.5d，摇床转速80-140转/分钟。