[发明专利]用于Ion Proton测序平台的TN5建库的引物组、试剂盒和建库方法

说明书

本发明公开了一种用于Ion Proton测序平台的TN5建库的引物组、试剂盒和建库方法。其中，引物组包括用于接头包埋的SEQ ID NO：1‑3所示的序列，以及用于PCR扩增的SEQ ID NO：4‑5所示的序列。本发明提供的引物组使得TN5转座酶能够高效、快速、微量的构建适于Ion Proton的文库，构建的文库可以直接上机测序。不仅摒弃了原始的复杂文库构建程序，而且操作简单，测序结果稳定。

技术领域

本发明涉及测序技术领域，尤其是一种用于Ion Proton测序平台的TN5建库的引物组、试剂盒和建库方法。

背景技术

生命技术(Life Technologies)公司研发的Ion Proton^TM基因测序仪采用了新一代半导体测序技术。该系统拥有快速、简单及可扩展等特征，能有效推进临床研究在癌症及遗传性疾病等诊断中的发展。但是在上机文库构建中，依然需要传统的DNA片段化、加接头、修复、片段选择等操作，过程繁琐，耗时较长。并且所需要的DNA起始量较高，不适合微量体系(<10ng)建库。虽然该公司在后期开发了基于MuA转座子的MuSeek^TM文库构建试剂盒(MuSeek^TMLibrary Preparation Kit)，但是依然需要较高的DNA起始量(>50ng)，并且试剂中的酶需要存储在-70℃冰箱中，使得一些小型、简单的实验室无法保存利用。

高度活化变异的TN5转座酶能够随机介导双链DNA的片段化并短时间内添加寡核苷酸片段，这使得TN5能够应用于二代测序的文库制备中。但是目前商品化的TN5转座酶主要应用于Hiseq测序仪平台中，illumina公司生产的Nextera DNA kits即是此类快速高效制备文库的代表。其它平台未见其应用。因此，亟需开发一种技术，使得TN5转座酶能够适于Ion Proton^TM的文库构建。

发明内容

本发明提供一种用于Ion Proton测序平台的TN5建库的引物组、试剂盒和建库方法，使得TN5转座酶能够高效、快速、微量的构建适于Ion Proton的文库，构建的文库可以直接上机测序。

根据本发明的第一方面，本发明提供一种用于Ion Proton测序平台的TN5建库的引物组，该引物组包括用于接头包埋的SEQ ID NO：1-3所示的序列，以及用于PCR扩增的SEQID NO：4-5所示的序列。

作为本发明的进一步改进的方案，上述引物组还包括用于PCR扩增的SEQ ID NO：6-7所示的序列。

作为本发明的进一步改进的方案，上述用于PCR扩增的SEQ ID NO：5所示的序列具体包括：SEQ ID NO：8-23所示的序列。

根据本发明的第二方面，本发明提供一种用于Ion Proton测序平台的TN5建库的试剂盒，该试剂盒包括第一方面的引物组。

作为本发明的进一步改进的方案，上述试剂盒还包括TN5转座酶，任选地还包括用于TN5转座酶的缓冲液。

作为本发明的进一步改进的方案，上述试剂盒还包括用于PCR扩增的聚合酶，任选地还包括用于上述聚合酶的缓冲液。

根据本发明的第三方面，本发明提供一种用于Ion Proton测序平台的TN5建库方法，该方法包括：使用SEQ ID NO：1-3所示的序列与TN5转座酶进行接头包埋；使用得到的包埋复合体对DNA进行片段化处理；使用SEQ ID NO：4-5所示的序列对片段化产物进行PCR扩增；以及对PCR扩增产物进行纯化。

作为本发明的进一步改进的方案，上述方法还包括：在PCR扩增过程中还使用SEQID NO：6-7所示的序列。

作为本发明的进一步改进的方案，上述SEQ ID NO：5所示的序列具体包括：SEQ IDNO：8-23所示的序列。