[发明专利]基于磁珠法提取血液基因组DNA的试剂盒及其使用方法

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种基于磁珠法提取血液基因组 DNA的试剂盒及其使用方法。

背景技术

近年来分子生物学技术飞速发展，基因组水平上的研究已成为广大研究 者们研究的热点。分子生物学的很多常规实验都需要以提取基因组DNA为前 提，无论是基因测序、PCR扩增、还是构建BCA文库等，而且提取到的基因 组DNA浓度、纯度、分子量范围和一级结构的完整性都会影响到下游分子生 物学实验。近年来精准医疗和体外诊断技术蓬勃发展，需要处理的样品量日 益庞大，因此高效、方便、可靠、高通量的DNA提取方法成为相关研究领域 的迫切需求。

DNA的提取方法很多，如酚/氯仿抽提法、高盐沉淀法等传统提取方法， 由于其提取效率低下，难以实现工业化应用，仅在科研领域尚有少量应用。 目前市场上商品化的血液基因组DNA提取方法主要是离心柱法，其原理是根 据DNA与离心柱上所修饰化学基团之间的氢键、静电等作用力，在高盐溶液 中离心柱特异性吸附DNA，漂洗蛋白质和其它杂质后，用低盐溶液洗脱得到 基因组DNA。离心柱型试剂盒较传统的DNA提取方法操作简单，缺点为需要 在离心管中操作，需要反复的离心清洗后方可获得DNA产物，操作过程需要 将离心柱频繁转出和转入离心管、并配合大量离心工作，导致操作时间随之 增加并且需要大量人工，针对一个或几个样品其操作效率可以接受，但针对 大规模高通量DNA提取工作依然不理想。当前，基因测序、精准医疗等研究 领域单个项目需要处理的DNA样品数量就可以达到几万、几十万甚至上百万 个，研究者们迫切需要开发一种更加高效、方便的血液基因组DNA提取方法。

近几年来磁珠法开始应用于不同体系DNA的提纯工作中。磁珠表面修饰 有特殊化学基团，在不同条件下可以对DNA分子形成特异性吸附或者解吸附 作用，再加上其本身拥有顺磁性的特性，富集DNA后与母液分离操作非常方 便。但现有技术中的方法是需要在对红细胞进行预处理后，对大体积的血液 DNA样本进行提取。该方法虽可对大体积的血液样本进行快速提取，可随着 样本增多，由于红细胞的预处理步骤，则提取时间明显增加，实验人员的工 作量也相应增加。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供了一种基于磁珠法提 取血液基因组DNA的试剂盒及其使用方法。该试剂盒可以从200μL新鲜或冷 冻抗凝血中提取高纯度基因组DNA，提取量可达到8-12μg，所得基因组DNA 产物可直接应用于临床体外检测使用；且提取步骤简便快捷，提取效率高。

为实现上述目的，本发明通过以下技术方案实现：

一种基于磁珠法提取血液基因组DNA的试剂盒，包括有分别独立分装的 细胞裂解液、蛋白酶k溶液、磁珠分散液、第一清洗液、第二清洗液和洗脱 液；

其中，所述细胞裂解液包括有胍类化合物、氯化钠和吐温20；所述胍类 化合物选自盐酸胍、异硫酸氰胍或其组合；

所述磁珠分散液中的磁珠采用内核为超顺磁性四氧化三铁，表面包覆有 硅羟基，粒径为200-800nm的磁珠；

所述第一清洗液包括有Tris碱、EDTA、异丙醇和水；

所述第二清洗液为乙醇溶液；

所述洗脱液为Tris碱或去离子水。

优选的是，所述的基于磁珠法提取血液基因组DNA的试剂盒，其中，所 述细胞裂解液中胍类化合物的浓度为5-7mol/L，氯化钠的浓度为 0.2-0.5mol/L，吐温20的体积分数为0.5％-2％。

优选的是，所述的基于磁珠法提取血液基因组DNA的试剂盒，其中，所 述磁珠分散液为磁珠浓度为20-40μg/μL的去离子水溶液。

优选的是，所述的基于磁珠法提取血液基因组DNA的试剂盒，其中，所 述第一清洗液中Tris碱的浓度为30-100mmol/L，EDTA的浓度为6-20mmol/L， 异丙醇的体积分数为45％-65％。

优选的是，所述的基于磁珠法提取血液基因组DNA的试剂盒，其中，当 所述洗脱液为Tris碱时，Tris碱的浓度为0.9-1.1mmol/L。

一种使用如上述方案中任一项所述的基于磁珠法提取血液基因组DNA的 试剂盒的提取方法，包括：

步骤一：向反应杯中依次加入待测血样、蛋白酶k溶液和细胞裂解液， 置于涡旋振荡器上混合充分，随后在55-60℃下裂解8-10分钟；