[发明专利]大叶相思花粉采集、贮藏以及离体培养活力检测技术

说明书

技术领域

本发明属于植物杂交育种领域，具体涉及一种提高大叶相思花粉萌发率的方法。

背景技术

大叶相思（Acacia auriculiformis）系含羞草科（Mimosaceae）金合欢属（Acacia Mill.）的植物。天然分布在南纬 5°～17°，原产于澳大利亚昆士兰、巴布亚新几内亚南部和西部、伊里安岛、印度尼西亚基岛。大叶相思生物量大，材质优良，可用作纸浆材、建筑材、家具用材等；具固氮作用，可用于改良土壤、荒山绿化等。然而，金合欢属树种普遍存在着结实率低的现象，大叶相思也不例外，这是制约其种植业进一步发展的关键问题之一。大叶相思结实低，且花期极易受台风、寒害等不良气候影响，造成产量低而不稳，从而限制了大叶相思的发展。花期人工辅助授粉促进座果率，提高种子产量，是较为有效的解决措施。花粉采集、贮藏、活力测定技术，是实现该措施必须的技术环节。因此，开展相思树植物的生殖生物学领域的研究具有重要意义。

花粉是种子植物的雄配子体，在有性繁殖中发挥着重要的作用。花粉的萌发、花粉管生长是植物有性生殖的重要环节，包含许多复杂的生理过程。花粉以花粉管为通道输送精子完成受精过程，花粉的萌发和花粉管生长是实现受精作用的关键。

金合欢属（Acacia）树种普遍存在着结实率低的现象，大叶相思( Acacia auriculiformis A. Cunn. ex Benth.)也不例外，这是制约其种植业进一步发展的关键问题之一。大叶相思结实低，且花期极易受雨水、台风等不良气候影响，造成产量低而不稳，从而限制了大叶相思的发展。花期人工辅助授粉促进座果率，提高种子产量，是较为有效的解决措施。

发明内容

本发明的目的在于提供大叶相思花粉采集、贮藏以及离体培养活力检测技术。

本发明所采取的技术方案是：

大叶相思花粉采集、贮藏以及离体培养活力检测技术，包括如下步骤：

（1）花粉采集：早晨采集当天开新鲜的大叶相思花序装入硫酸纸袋中，放入25℃～30℃室内阴干，待第二天早晨10点以后花药大量爆裂时收集花粉，用花粉筛过筛；

（2）花粉贮藏：将收集好的花粉置于小玻璃瓶中，加入干燥变色硅胶，抽真空，蜡封，将封好的花粉置于25℃～－25℃下贮藏；

（3）花粉萌发：将贮藏的花粉置于液体培养基中，25℃～35℃下萌发。

作为优选的：步骤（1）是在早晨露水未干前采集当天开的新鲜花序。

作为优选的：步骤（1）将收集的花序置于28℃恒温室中，平铺在硫酸纸上阴干。

作为优选的：步骤（1）中，花粉用200目的筛子过筛。

作为优选的：步骤（2）将花粉置于5℃或－20℃下贮藏。

步骤（3）所述的液体培养基由蔗糖、硼酸和水配置而成。

作为优选的：步骤（3）所述的液体培养基的组成为：100～200g/L蔗糖，100～300 mg/L硼酸，余量为水。

进一步优选的：所述液体培养基的组成为：200g/L蔗糖，300 mg/L硼酸，余量为水。

作为优选的：步骤（3）中，花粉于30℃恒温下萌发。

本发明的有益效果是：

1、本发明大叶相思花粉采集方法，在恒温室阴干时控制时间掌握，观察到花药完全爆裂时再进行刷粉过筛，解决了大叶相思花粉细小不易收集这一难题。

2、本发明大叶相思花粉贮藏方法，分别放置在不同的环境中贮藏，通过花粉活力检测，检测出随着贮藏时间不断增长，在-20℃的环境下贮藏的花粉活力最强，解决了大叶相思花粉贮藏这一难题。

3、本方法采用的液体培养基中含有20% 蔗糖、300ppm的硼酸配制而成，液体稳定可靠，特别适合大叶相思花粉离休培养。

4、在载玻片凹槽上滴1-2滴液体培养基，将收集好的大叶相思花粉掸置液体培养基上，花粉可以与氧气直接接触，且花粉分布均匀，从而大叶相思树花粉能够正常萌发。这一操作要点解决了相思树花粉离体培养发芽关键技术。

5、本方法对大叶相思树花粉采集、贮藏、离休培养和活力检测，方法简单、迅速且可操作性强等特点，数据科学可靠，并可完全定量，对于提高大叶相思树育种效率具有较高的实际应用价值，可有效解决现有相思树种子园自然结荚率低的问题，提高种子园的产量和质量，使种子园能够有效地发挥其应有的功能，极大地发挥相思树树种的经济效益、社会效益和生态效益。

附图说明

图1：用于花粉收集的大叶相思花序；