[发明专利]短小芽孢杆菌和蛭弧菌的液体制剂及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及饲料添加剂技术领域，具体地说，是短小芽孢杆菌和蛭弧菌的液体制剂及其应用。 

背景技术

弧菌属于弧菌科弧菌属，是一类革兰氏阴性、具极生鞭毛、能运动、无芽孢的短杆状细菌，其中有的弧菌有一定的弯曲，欠柔软，有的弯曲不明显。弧菌是海洋细菌的优势类群之一，广泛分布于世界各地各类河口、内湾、沿岸、水体养殖区和外海的水体及沉积物中，各种海洋生物体表或体内也常生存着高密度海洋弧菌，在海洋环境中占据着重要的生态地位，具有多种多样的生理、生态功能，在海洋微食物环中扮演重要角色，对海洋的营养物的循环起着非常重要的作用。但同时，弧菌又是水生动物中的一类重要的病原菌。 

随着高密度海水养殖业快速发展，对养殖环境的污染日益加剧。水产品的病害已成为海水养殖业发展的主要问题。弧菌病是由弧菌属细菌引起的一类细菌性疾病，该病在全球范围内广泛发生，其爆发性流行不仅给海水养殖鱼类、贝类及甲壳类等经济动物的养殖业造成巨大的经济损失，还导致野生的海水鱼类、贝类及甲壳类的大量死亡。弧菌病是最严重的疾病之一，其死亡率甚至高达100％。 

为了控制病害，通常过度使用抗生素类药物，这不仅造成养殖产品的药物残留，而且还提高了病原细菌的耐药性，引起抗性基因的转移，导致生态失调。2005年，欧盟已禁止在动物养殖中使用一切非治疗性抗生素。因此，寻找抗生素的替代药物、探索新的防治方式已经迫在眉睫。 

中国专利文献CN101275119公开了一种蛭弧菌在消除淡水产品及其养殖水体中致病菌的应用，特别适用于消除淡水产品食用或加工前、运输过程及其养殖水体中携带的致病菌。在污染了致病菌的淡水产品养殖水体中、食用前、加工前或运输过程中加入蛭弧菌浓缩液，使其浓度至少达到10³pfu/ml。淡水产品食用或加工前、运输过程中或养殖水体中应用该法时，蛭弧菌游泳体浓度范围分别为10⁵～10¹³pfu/ml；10⁴～10¹²pfu/ml；10³～10⁷pfu/ml。中国专利文献CN101781627A公开了一种海水蛭弧菌微生态制剂的制备与应用，涉及一种海水微生态制剂，需要提供适合于海水养殖用的蛭弧菌制剂的制备方法。该发 明由以下步骤组成：制备宿主菌悬液；蛭弧菌的分离、纯化；蛭弧菌增殖培养，其特征是将施氏假单胞菌接斜面活化后，在试管中加入生理盐水制得菌悬液，然后用营养肉汤增殖培养，在所得菌液中加入絮凝剂，摇匀后静置沉淀，加入生理盐水得到10¹²cfu/mL的宿主菌悬液；用双层琼脂平板法对采集的海水和底泥样品进行蛭弧菌的分离和纯化，将含有宿主菌悬液和采集样品的培养基混匀后倒入下层海水琼脂上培养，将宿主菌和分离得到的蛭弧菌加入到灭菌天然海水中培养至蛭弧菌浓度为10⁸～10⁹pfu/mL，备用。中国专利文献CN101948784A公开了一种蛭弧菌制剂及其发酵方法和应用。发酵方法包括以下步骤：(1)宿主菌悬液的制备；(2)蛭弧菌游泳体浓缩液的制备；(3)蛭弧菌制剂的制备。中国专利文献CN102217655A公开了一种粉状噬菌蛭弧菌制剂及其制备方法，以沸石粉作为赋形载体，利用喷雾干燥技术制备粉状噬菌蛭弧菌制剂。中国专利文献CN102726634A公开了一种海参用微生态饲料及其制备方法，饲料包括噬菌蛭弧菌、枯草芽孢杆菌和辅料；所述噬菌蛭弧菌在微生态饲料中的浓度为10⁶-10¹⁰个/g，所述枯草芽孢杆菌在微生态饲料中的浓度为10⁶-10¹⁰个/g，所述辅料包括氮源、碳源和磷酸盐。中国专利文献CN103719535A公开了一种噬菌蛭弧菌微胶囊，所述微胶囊的壁为明胶，颗粒呈球形，表面有凹陷，但没有孔和裂纹，所述颗粒粒径大小为3～12μm，分布基本均匀，且其中，噬菌蛭弧菌的含量为3.69×10⁷pfu/g～3.70×10⁷pfu/g，大肠杆菌DH5α的含量为8.6×10⁹pfu/g～2.10×10¹⁰pfu/g。该微胶囊的制备方法，其包括步骤：1)大肠杆菌DH5α菌悬液的制备；2)噬菌蛭弧菌培养液的制备；和3)将步骤1)的大肠杆菌DH5α菌悬液和步骤2)的噬菌蛭弧菌培养液与无菌明胶溶液均匀混合后，进行喷雾干燥，最终制备成微胶囊。中国专利文献CN103907596A公开了一种蛭弧菌颗粒剂，由植物油、质量浓度为5％-10％的琼脂和蛭弧菌含量为10¹⁰-10¹¹CFU/mL的菌液按照体积比为3：50：100的比例混合，然后加入质量浓度为2％的羧甲基纤维素钠并混合均匀，将混合液滴入到质量分数为10％的CaCl₂溶液中固化12h，再将蛭弧菌固化颗粒于-20℃条件下冷冻干燥24h制得的颗粒剂。中国专利文献CN104099268A公开了一种水产养殖复合微生物菌剂，其包括如下菌剂及其重量份：枯草芽孢杆菌5-10份，地衣芽孢杆菌0.5-4份，巨大芽孢杆菌1-6份，胶质红假单胞菌0.2-1份，荚膜红假单胞菌0.5-3份，噬菌蛭弧菌2-8份。中国专利文献CN101356927公开了一种蛭弧菌在消除海产品及其养殖水体中致病性弧菌的应用，在污染了致病性弧菌的海产品和/或养 殖水体中加入蛭弧菌浓缩液，使蛭弧菌的浓度至少达到10²pfu/ml。海产品食用前、运输过程以及养殖水体中应用该法时，蛭弧菌浓度范围分别为10⁴～10¹²pfu/ml、10³～10¹¹pfu/ml、10²～10⁶pfu/ml。