[发明专利]一种用于圆锥掘氏梅里霉的培养基和培养方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物技术领域，涉及一种真菌的培养基和培养方法，特别是涉及一种快速提高线虫生防真菌——圆锥掘氏梅里霉的生物量及缩短产孢周期的培养基和培养方法。

背景技术

植物寄生线虫在许多农业及园艺经济作物造成严重的损失。其中根结线虫或胞囊线虫等内寄生线虫可以导致农作物产量损失在10％-50％。据统计，由于植物内寄生线虫造成的全世界作物损失已经达到每年超过1000亿美元。

圆锥掘氏梅里霉[Drechmeria coniospora ARSEF 6962]是一种非常重要的线虫内寄生生防真菌，是内寄生型食线虫真菌。

圆锥掘氏梅里霉隶属于真菌界、子囊菌门、粪壳菌纲、肉座菌目、麦角菌科的掘氏梅里霉属。国内外文献报道该菌具有生物防治植物寄生线虫潜力的线虫内寄生真菌。被许多科学家用作研究真菌与线虫识别机制的好材料。

但是，提高圆锥掘氏梅里霉培养的生物量和缩短培养周期是目前需要研究的技术问题。文献报道，利用现有的培养基对该真菌菌株进行培养，如PDA(potato-dextrose-agar)培养基、CMA(corn-meal-agar)培养基和SDAY(dextrose-neopeptone-yeast extract-agar)培养基，真菌的产量低(生物量低)，且产孢周期长(约为8-10周)。这严重限制了圆锥掘氏梅里霉大规模生产培养，也影响了其使用。

本发明针对圆锥掘氏梅里霉产量及应用受到培养条件严重限制的前提下，尝试改善的培养方法，并最终克服了该真菌实验室培养周期长，产量低的缺点。

发明内容

本发明的最终目的是提供一种圆锥掘氏梅里霉[Drechmeria coniospora ARSEF 6962]的新的培养方法，提高生物量，缩短培养周期，便于其大规模生产。

本发明的直接目的是找到培养圆锥掘氏梅里霉的培养皿固体培养基中提高生物量的新的成分。

本发明人通过大量实验研究工作，首次发现，在培养基中加入动物的肝和/或肾，能够达到上述发明目的。

特别是，发明人对本发明固体培养中重要成分-动物肝脏和肾脏的含量和组成比例与培养菌株的菌体生长周期进行了以下相关性分析：

1)动物肝脏和/或肾脏的合适用量；

2)动物肝脏与肾脏的用量比；

3)所用肝脏与肾脏的动物种类。

从上述实验结果，本发明得到的解决方案是：

一种圆锥掘氏梅里霉的培养方法，采用培养皿固体培养基在室温条件下培养圆锥掘氏梅里霉，其特征是所述培养基中含有动物的肝脏和/或肾脏，且所述动物肝脏和肾脏在培养基中的含量是：每100mL培养基中，含动物肝脏1g～50g，动物肾脏1g～50g。

优选含量范围是：每100mL培养基中，含动物肝脏7g～12g、动物肾脏7g～12g。动物肝脏与肾脏成分能够有效地提高该真菌生物量，缩短培养产孢周期。

所述的培养皿固体培养基中的其它成分是NaCl、琼脂及无菌水。

上述配制的培养基为液体，经过121℃灭菌后转变为固体，用于培养圆锥掘氏梅里霉。

在本发明一个实施例中，培养基成分如下：每100mL培养基中，含动物肝脏10g、动物肾脏10g、NaCl 0.5g、琼脂1.5g、加入无菌水定容。

所述动物肝脏和肾脏优选新鲜或冷冻保存的组织材料。

所述动物是哺乳动物，优选猪、牛、羊的肝和肾。

所述培养基的配制方法是：

1)称取动物肝脏与动物肾脏，切成小块，用匀浆机将肝脏与肾脏组织打碎；

2)在上述所得组织匀浆中加入NaCl和琼脂粉，随后加入蒸馏水定容；

3)121℃灭菌15min。

用上述培养基对圆锥掘氏梅里霉进行培养的方法是：将保存的圆锥掘氏梅里霉分生孢子涂布在培养基表面。利用封口膜对培养皿进行密封，保持培养基中水分含量。将涂有菌株的培养皿放置于培养箱中进行培养。培养温度25±2℃，培养周期为7-8天。

本发明的有益效果为

经实验证明，本发明首次采用含动物肝脏和/或肾脏制备的固体培养基培养获得的圆锥掘氏梅里霉，生物量明显提高，产孢周期8-16天，显著缩短。相对于目前文献报道的采用PDA培养基、CMA培养基对该真菌培养产量低，产孢周期为8-10周相比，具有工艺简单、设备要求低，且圆锥掘氏梅里霉生物量显著提高，培养周期缩短85％以上(详见实施例)。