[发明专利]适用于大肠杆菌发酵生产重组蛋白的培养基

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程研究中所用的培养基，尤其是涉及一种适用于大肠杆菌发酵生产重组蛋白的培养基。

背景技术

通过采用基因工程手段将麦芽糖结合蛋白（MBP）与幽门螺旋杆菌中性粒细胞激活蛋白（HP-NAP）进行融合得到重组蛋白rMBP-NAP，并转化到大肠杆菌E. coli TB1中，再运用LB培养基进行发酵并用IPTG对E. coli TB1进行诱导，使其表达重组蛋白rMBP-NAP，然后再进行后续的一些药效研究。研究中发现，通过这种发酵方式得到的重组蛋白产量很低，而且LB培养基中各个组分的成本又很高。如果要进行正常的药效研究，就需要获得大量的重组蛋白，所以现有的LB培养基已满足不了研究需要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种适用于大肠杆菌E. coli TB1发酵生产重组蛋白rMBP-NAP的培养基。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的适用于大肠杆菌发酵生产重组蛋白的培养基（PCY），是由下述原料按比例配制而成：磷酸盐和氯盐混合溶液200ml/L，20%葡萄糖溶液20ml/L，酵母浸粉30g/L；所述磷酸盐和氯盐混合溶液中，Na₂HPO₄·12H₂O含量为 85.481g/L，KH₂PO₄ 含量为15g/L，NaCl含量为2.5g/L，NH₄Cl含量为 5.0g/L。。

本发明培养基（PCY）的配制方法如下：

首先按上述比例配制磷酸盐和氯盐混合溶液，高温高压灭菌后储存备用；

配制20%葡萄糖溶液，0.22μm滤器过滤除菌后备用；

按一定体积配制酵母浸粉溶液，高温高压灭菌后备用；

将磷酸盐和氯盐混合溶液、酵母浸粉溶液冷却后混合，最后加入20%的葡萄糖溶液即可。

本发明的优点在于用上述原料配制的培养基（PCY）成本低，培养基成分主要由磷酸盐和氯盐以及葡萄糖和酵母粉组成，而且葡萄糖用量很少，其中酵母浸粉的存在给大肠杆菌的生长提供了可用的有机氮源，保证了大肠杆菌E. coli TB1在该培养基中能正常生长，并且通过PCY培养基发酵获得的目的蛋白rMBP-NAP的产量相对比较高，如果用此培养基在同一条件下和运用LB培养基发酵获得的目的蛋白产量相比，用此培养基发酵生产产量可提高10%左右，满足了后续药效研究的需要。

附图说明

图1是SDS-PAGE电泳分析图谱结果。

具体实施方式

下面以配制终体积为1L的PCY培养基为例进行详细说明。

1、分别称取Na₂HPO₄·12H₂O  85.481g， KH₂PO₄  15g ，NaCl 2.5g ，NH₄Cl  5.0g ，将其溶解在1L的蒸馏水中，制得磷酸盐和氯盐混合溶液，高温（121℃）高压（0.15MPa）灭菌后冷却备用；

2、配制20%的葡萄糖溶液20ml，0.22μm滤器过滤除菌后备用；

3、称取30g酵母浸粉，用少量蒸馏水溶解后，定容至780ml，高温（121℃）高压（0.15MPa）灭菌后冷却备用；

4、待磷酸盐和氯盐混合溶液、酵母浸粉溶液冷却至40-50℃时，取磷酸盐和氯盐混合溶液200ml，葡萄糖溶液20ml与780ml的酵母浸粉溶液在超净工作台上进行混合，得到终体积为1L的PCY培养基。

如果在发酵罐中进行本培养基的配制操作时，可以先将磷酸盐和氯盐混合溶液配制好灭菌备用，20%葡萄糖溶液配制好灭菌备用；将酵母浸粉用蒸馏水溶解后在发酵罐中进行实罐灭菌，冷却后用火圈接种的形式将前两种已经灭菌后的溶液与酵母浸粉溶液进行混合然后使用。

表1为大肠杆菌E. coli TB1分别在六种不同培养基中发酵终止后得到的终止OD₆₀₀和表达量以及干重。

表1