[发明专利]一种环酯肽Orfamide A的固相合成方法

说明书

技术领域

本发明涉及药物合成技术领域，具体涉及一种环酯肽Orfamide A的固相合成方法。

背景技术

Orfamide A是一种由荧光假单胞菌产生的，在2007年报告的环脂肽的主要成分。其结构如下式所示：

W.H.Gerwick等通过生物信息学方法预测出Orfamide A生物合成中需要某些特殊的前体，并用同位素标记的前体物质喂养微生物，然后用同位素标记指导的分离检测方法成功地得到了化合物orfamide A。经研究，Orfamide似乎是有选择性的抗真菌剂。与众不同的是，Orfamide A能够溶解卵菌亚纲真菌及造成橡树猝死的橡树猝死病原菌的游动孢子。而且，Orfamide A对于细菌在琼脂表面上的群体性运动能够产生深远的影响。

然而，目前仅仅能够通过生物分离的方法获得环酯肽Orfamide A，尚没有人工合成Orfamide A的相关报道。

发明内容

本发明针对现有技术中存在的上述缺陷，提供了一种能够高效，规模化地生产环酯肽Orfamide A的方法。

为此，本发明提供了一种固相合成环酯肽Orfamide A的方法，包括如下步骤：

1、Fmoc-D-Ser-OAll与固相载体树脂合成，获得Fmoc-D-Ser(树脂)-OAll；

2、Fmoc-D-Ser(树脂)-OAll采用逐一偶联的方式依次偶联Leu、Leu、D-Ser、Leu、D-allo Ile、Thr，并在Thr的侧链羟基上偶联Val，脱除Val氨基保护基Alloc及Ser上的羧基保护基All，在树脂上形成环肽，然后依次继续偶联D-Glu、Leu、3-羟基十四烷酸，获得Orfamide A-肽树脂；

3、Orfamide A-肽树脂经裂解反应，获得Orfamide A粗肽；

4、Orfamide A粗肽经纯化、转盐和冻干后获得Orfamide A纯品。

在本发明优选的实施方案中，步骤1中采用的固相载体树脂为DHP HM树脂。其中，DHP HM树脂与D-Ser偶联的位置优选为侧链的羟基。

在本发明优选的实施方案中，步骤1中获得的Fmoc-D-Ser(树脂)-OAll的替代度为0.2～0.5mmol/g。

在本发明固相合成环酯肽Orfamide A的方法中，在步骤2中采用的逐一偶联的方式中，偶联Thr后，其氨基保护基Fmoc不能预先脱除。

在本发明固相合成环酯肽Orfamide A的方法中，步骤2中采用的Val与Thr偶联的位置为Thr的羟基，而Val的氨基保护基为Alloc。

在本发明优选的实施方案中，步骤2中采用的Val与Thr形成酯键的偶联体系为DIC/HOBt/DMAP或PyBOP/HOBt/DMAP/DIPEA。

在本发明优选的实施方案中，步骤2中采用的All和Alloc保护基团脱除的试剂为Pd(PPh₃)₄和苯基硅烷。

在本发明优选的实施方案中，步骤2中采用的树脂上成环的偶联体系为HATU/HOAt/DIPEA或PyBOP/HOBt/DIPEA。

在本发明固相合成环酯肽Orfamide A的方法中，步骤3中采用的裂解反应所采用的裂解试剂为TFA:TIS:H₂O=90～98:0～5:2～5（V:V）。在本发明优选的实施方案中，裂解试剂优选为TFA:TIS:水=90:5:5(V/V)、TFA:水=98:2(V/V)、TFA:TIS:水=95:2:3(V/V)或TFA:TIS:水=94:3:3(V/V)。

在本发明优选的实施方案中，步骤4中所述的纯化方法为反相高效液相色谱纯化法，色谱柱优选为反相C18柱。

由上述描述可知，与现有技术相比，本发明采用了纯固相的方法合成了环酯肽Orfamide A，该方法能够高效，规模化地生产环酯肽Orfamide A。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明作进一步的详细说明，旨在用于说明本发明而非限定本发明。应当指出，对于本领域技术人员而言，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也同样落入本发明的保护范围之内。

本发明所使用的缩写的含义列于下表中。

实施例1：替代度为0.2mmol/g的Fmoc-D-Ser(Resin)-OAll的制备