[发明专利]KLF9基因在抑制肝癌中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及肿瘤治疗领域。具体地，本发明涉及KLF9基因在促进p53表达和/或活性，从而抑制肝癌中的应用。

背景技术

随着近年来分子生物学技术的发展及人类基因谱的不断完善，人们对肝癌发病原因及发病机制又有了新的认识，即肝癌相关的癌基因的激活及抑癌基因的失活与突变是导致肝细胞癌变的根本原因。细胞内的癌基因与抑癌基因对细胞的增殖与分化起着正负调节作用。所以说，在分子水平上与肝癌相关癌基因与抑癌基因的变化是肝癌发生的根本原因。

与此同时，人们提出了一个全新的概念:基因治疗，为癌症的治疗带来了新的希望。所谓癌症的基因治疗就是指以遗传学技术为基础，将克隆的正常基因序列导入该基因缺陷的患者体内，使导入的基因发挥作用而纠正基因缺陷，或设计出已经突变的癌基因的反义序列导入患者体内，阻止突变的癌基因发挥其效应。癌症的基因治疗最终目的是通过不同途径杀伤肿瘤细胞，抑制肿瘤生长使肿瘤消退。所以，癌症的基因治疗是对肿瘤细胞恶变过程的逆转，对正常细胞并没有影响。

目前，抑癌基因的产物主要包括：①转录调节因子，如Rb、p53；②负调控转录因子，如WT；③周期蛋白依赖性激酶抑制因子(CKI)，如p15、p16、p21；④信号通路的抑制因子，如ras GTP酶活化蛋白(NF-1)，磷脂酶(PTEN)；⑥DNA修复因子，如BRCA1、BRCA2。⑥与发育和干细胞增殖相关的信号途径组分，如：APC、Axin等。

此外，随着越来越多的潜在抑癌基因被发现，在癌症与抑癌平衡中庞大、复杂的细胞通路也逐渐暴露。人们甚至发现，在相似的细胞通路中，同一个基因所起到作用也不尽相同。因此，本领域迫切需要研究对各种肿瘤尤其是肝癌具有特异性的影响基因，并明确其作用机制，以开发更有效的基因治疗药物。

发明内容

本发明提供了KLF9基因及其表达产物在促进p53表达和或活性从而抑制肝癌中的应用。

本发明的第一方面，提供了一种KLF9(Krüppel-like factor9，KLF9)基因、蛋白或其促进剂的用途，用于制备p53的促效剂；和/或

用于制备预防和/或治疗肝癌的药物组合物。

在另一优选例中，所述的KLF9基因核苷酸序列如SEQ ID NO.:1所示，其编码的蛋白序列如SEQ ID NO.:2所示。

在另一优选例中，所述的KLF9基因来自哺乳动物，较佳地，来自啮齿动物(大鼠、小鼠)和灵长动物(例如人)，更佳地，来自人。

在另一优选例中，所述的促效剂包括p53表达促进剂和/或p53蛋白活性稳定剂。

在另一优选例中，所述促效剂用于促进p53的表达和/或促进p53蛋白的稳定。

在另一优选例中，所述的KLF9蛋白包括全长KLF9蛋白、成熟的KLF9蛋白、KLF9的与DNA结合的结构域ZNF、或含所述ZNF结构域的KLF9活性片段。

在另一优选例中，所述的促进剂包括KLF9基因表达产物、促进型miRNA、促进型转录调控因子、或促进型靶向小分子化合物。

在另一优选例中，所述的药物组合物包括(i)KLF9基因、蛋白或其促进剂；和(ii)药学上可接受的载体。

本发明第二方面，提供了一种筛选候选化合物的方法，所述化合物可作为KLF9促进剂，包括步骤：

(a)在测试组中，向细胞培养体系中加入待测化合物，并测定p53和KLF9的表达和/或活性；在对照组中，向同样的培养体系中不加入待测化合物，并测定p53和KLF9的表达和/或活性；其中所述待测化合物不是KLF9蛋白；

其中，如果对照组中p53的表达和/或活性大于对照组，且对照组中KLF9的表达和/或活性大于对照组，则说明该候选化合物为KLF9促进剂。

在另一优选例中，还包括步骤：

(b)对步骤(a)中获得的候选化合物进一步测试其抑制肝癌的效果。

本发明第三方面，提供了一种KLF9的ZNF结构域的肽序列或核苷酸序列的用途，其特征在于，用于制备p53的促效剂；和/或

用于制备预防和/或治疗肝癌的药物组合物。

本发明第四方面，同了一种KLF9基因或其蛋白的用途，用于制备诊断肝癌的试剂或试剂盒。

在另一优选例中，所述的试剂包括KLF9的特异性引物、特异性抗体、探针和/或芯片。

在另一优选例中，所述的检测KLF9蛋白或mRNA的检测试剂包括：

(a).抗KLF9蛋白的特异性抗体；和/或