[发明专利]纤溶活性化合物FGFC1的分离纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及发酵液的分离纯化，尤其涉及一种从发酵液中分离纯化FGFC1的方法。

背景技术

FGFC1是一种具有纤溶活性的微生物天然产物，由海洋真菌长孢葡萄穗霉Stachybotrys longispora FG216（CCTCC NO.C22010068）发酵产生，活性研究表明，其具有促进纤溶酶原和单链尿激酶型纤溶酶原激活剂相互活化的作用，有望开发成为药物，具有良好的应用前景。

现有文献报道的分离纯化方法为：

甲醇抽提发酵液后用HPLC分离制备，具体工艺如下：FGFC1发酵液与等体积甲醇混合，超声15min，在转速10000rpm条件下离心15min，所得上清液减压浓缩、真空干燥得到含有FGFC1的干固物，而后用少量甲醇溶解，溶解后的溶液用半制备型高效液相色谱仪，色谱柱Sepax HP-C18柱（21.2mm×250mm,10μm）分离，色谱条件为：流动相：A相：0.05M乙酸铵；B相：甲醇；A：B=30：70。洗脱条件为：流速10ml/mim，进样量为0.5ml，检测波长265nm。

该方法存在以下不足:

(1)用甲醇进行抽提，成本较高；且甲醇具有一定毒性；

(2)使用粒径为10μm的反相C18填料进行层析，属于高压色谱，对设备要求较高；层析填料化学稳定性差，不耐酸碱，易污染。层析流动相中含有无机盐乙酸铵，给FCFG1的后续精制过程增加了难度。

综上所述，该方法不适于规模化的制备FGFC1。

因此，本领域迫切需要提供一种从海洋真菌长孢葡萄穗霉Stachybotrys longispora FG216（CCTCC NO.C22010068）的发酵液中分离纯化纤溶活性化合物FGFC1的方法。

发明内容

本发明旨在提供一种从发酵液中分离纯化FGFC1的方法。

本发明提供了一种从发酵液中分离纯化FGFC1的方法，所述方法包括步骤：

（1）将FGFC1菌丝体和碱性水溶液混合、抽提，固液分离后得到抽提液；和

（2）将抽提液和有机溶剂混合后上柱经大孔聚合物填料层析，用有机溶剂与水的碱性混合溶液洗脱，得到FGFC1馏分。

在另一优选例中，所述大孔聚合物填料为非极性大孔聚合物填料。

在另一优选例中，所述的非极性聚合物填料的骨架选自聚苯乙烯-二乙烯苯或甲基丙烯酸酯；更优选聚苯乙烯-二乙烯苯。

在另一优选例中，所述大孔聚合物填料粒径为30-200μm；更优选30-150μm。

在另一优选例中，步骤（1）中所述碱性水溶液为可溶性无机碱的水溶液；更优选，所述可溶性无机碱的水溶液选自氢氧化钠水溶液或氢氧化钾水溶液。

在另一优选例中，步骤（1）中所述碱性水溶液的pH为8-14；更优选为pH11-13。

在另一优选例中，步骤（2）中以所述有机溶剂与水的碱性混合溶液的总体积计，其中含有有机溶剂20-80％；更优选为30-60％。

在另一优选例中，以抽提液和有机溶剂的混合溶液的总体积计，其中含有有机溶剂5-35％；更优选为15-30％。

在另一优选例中，步骤（2）中所述抽提液和有机溶剂的混合溶液的pH为4-12；更优选pH为6.5。

在另一优选例中，所述方法还包括步骤：经HPLC测定后，将HPLC峰纯度≥95%的FGFC1馏分进行收集，得到FGFC1的纯化液。

在另一优选例中，所述方法还包括步骤：将收集得到的FGFC1的HPLC纯度大于等于95%的馏分，通过减压蒸发去除有机溶剂得到水溶液，所得水溶液冷冻干燥后得到FGFC1的干粉。

在另一优选例中，所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮或乙腈；更优选乙醇。

据此，本发明提供了一种从海洋真菌长孢葡萄穗霉Stachybotrys longispora FG216（CCTCC NO.C22010068）的发酵液中分离纯化纤溶活性化合物FGFC1的方法。

附图说明

图1显示了实施例制备得到的FGFC1的MS图谱。

具体实施方式

发明人经过广泛而深入的研究，惊奇地发现将FGFC1发酵液的菌丝体经过碱性水溶液抽提、大孔聚合物填料层析，可简单有效地得到高纯度的FGFC1。

如本文所用，“FGFC1”是指分子式为C₅₁H₆₈N₂O₁₀的物质，其结构式为：