[发明专利]ELISA检测融合蛋白rMBP‑NAP的方法

权利要求书

1.ELISA检测融合蛋白rMBP-NAP的方法，包括以下步骤：

1）包被：将100ul被包被缓冲液稀释至500ng/mL的兔抗幽门螺杆菌NAP多抗，包被至固体载体，用洗涤缓冲液洗涤  

2）封闭：再加封闭液以封闭，孵育后洗涤

3）加样：分别加入100ul工作浓度的rMBP-NAP抗原标准品和待测样品，孵育后洗涤

4）分别加入稀释至50ng/mL的小鼠MBP单抗100ul，孵育后洗涤

5）分别加入稀释至1mg/mL的、辣根过氧化物酶HRP标记的羊抗小鼠IgG抗体100ul，孵育后洗涤

6）加入底物显色，并于450nm波长处测定吸光值OD。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述兔抗幽门螺杆菌NAP多抗的制备方法为：以rMBP-NAP免疫兔得到多抗血清，再经以NAP-GST融合蛋白为配体的亲和层析纯化制得。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述亲和层析包括：上样前，用磷酸盐浓度10mM、pH为7.4的PBS缓冲液平衡层析柱，该缓冲液中NaCl浓度为137mM。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述亲和层析包括：在洗脱前，用磷酸盐浓度10mM、pH为7.4的PBS缓冲液洗涤，该缓冲液中NaCl浓度为500mM。

5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述亲和层析包括:使用0.1 mol/L、pH2.5的甘氨酸-HCl缓冲液将兔抗幽门螺杆菌NAP多抗洗脱。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述封闭液为磷酸盐浓度为0.15 mol/L、吐温20的体积分数为0.05%、pH 7.4 的PBST缓冲液，其中还含有质量体积分数为2-5%的牛血清白蛋白。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述包被缓冲液为0.05mol/L 、pH9.6的碳酸盐缓冲液。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤1-5的洗涤条件独立地选自：使用0.15 mol/L、pH 7.4 PBST缓冲液进行洗涤。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤4或5所用稀释液为磷酸盐浓度为0.15 mol/L、吐温20的质量分数为0.05%、pH 7.4 的PBST缓冲液。

10.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤2、3、4或5中孵育的条件为：37 ℃孵育1h。